[发明专利]一种绵羊瘤胃上皮细胞的分离培养方法有效
| 申请号： | 201710363364.X | 申请日： | 2017-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN106967674B | 公开（公告）日： | 2020-07-10 |
| 发明（设计）人： | 欧阳克蕙;彭志鹏;王文君;瞿明仁;许兰娇 | 申请（专利权）人： | 江西农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 江西省专利事务所 36100 | 代理人： | 胡里程 |
| 地址： | 330045 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明公开一种绵羊瘤胃上皮细胞的分离培养方法。本发明对瘤胃上皮细胞分离培养进行改进，通过此方法能有效获得活力高、贴壁早、生长快的瘤胃上皮细胞。普通消化分离方法所得的细胞接种后3～6 d开始贴壁，8～10 d完成铺层，而通过所述的消化分离方法所得的细胞在12～24 h开始贴壁，2～3 d完成铺层。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 绵羊 瘤胃 上皮细胞 分离 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种绵羊瘤胃上皮细胞的分离培养方法，其步骤：A 获取瘤胃组织，将瘤胃内容物冲洗干净；B 钝性分离并清洗瘤胃上皮组织；C 将上皮组织剪碎，用I型胶原酶和胰蛋白酶进行处理；D 机械分离法辅助性吹散细胞，收集细胞悬液；E 重复胰蛋白酶消化处理直至组织块消失，收集细胞悬液；F 细胞悬液进行过滤，离心收集细胞；G 去除上层液体，用完全培养基重悬细胞后，接种于培养瓶中培养；H 换瓶培养以去除大部分成纤维细胞；I 24 h后换培养基，2～3 d后完成铺层，即培养所得细胞为瘤胃上皮细胞；J 铺层至80%～90%时，用胰蛋白酶消化后可进行传代或者液氮冻存。
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