[发明专利]中国人胰腺癌细胞系sipanc-187建立方法

摘要

本发明公开了一种中国人胰腺癌细胞系sipanc‑187建立方法，包括以下步骤：1.标本采集2.组织消化3.PDX裸鼠荷瘤4.成瘤细胞培养与传代。本发明有益的效果：本发明构建的中国人胰腺癌细胞系sipanc‑187生物学特征为胰腺导管腺癌，其成瘤性良好，具有一定的耐药性，可较好地应用胰腺癌肿瘤、化疗耐药机制研究及中国人胰腺癌相关基因谱系分析等。

主权项

1.一种中国人胰腺癌细胞系sipanc‑187建立方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：(1)、标本采集并制成组织块；(2)、组织消化：将上述组织块用5mlPBS重悬，加入700ul灭菌水配置的IV型胶原酶，工作浓度1437u/ml；25ul的无菌CaCl2溶液，工作浓度1M；25‑30mgBSA粉末，摇床37℃，200转/分，孵育30分钟后，将上述组织悬液自摇床取出，70um级滤网过滤除去未消化组织块，将滤过的细胞悬液加10mlPBS洗涤后，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清，加入5ml裂红液冰上裂解5分钟，再次加10mlPBS洗涤，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清后使用1mlPBS重悬；(3)、PDX模型建立：将上述细胞计数，计取1*106个细胞，并取100ulPBS重悬稀释，接种5‑6周大小裸鼠皮下，接种部位为腋下，荷瘤12‑14天后皮下荷瘤模型成瘤；(4)、组织处理：脱颈椎法处死裸鼠，安全通风柜内手术完整分离PDX肿瘤组织，立即浸入20ml完全培养基，完全培养基采用RPMI 1640配置，含终浓度10％FBS(v/v％)及青霉素/链霉素双抗各100mg/ml，安全通风柜内使用20mlPBS反复冲洗组织，洗净并去除肉眼可见血块及坏死组织，取直径1*1*1‑1.5*1.5*1.5cm大小肿瘤，将其剪碎成为1mm3大小组织块；(5)、组织消化：将上述小组织块用5mlPBS重悬，加入700ul灭菌水配置的IV型胶原酶，工作浓度1437u/ml；25ul的无菌CaCl2溶液，工作浓度1M；25‑30mgBSA粉末，摇床37℃，200转/分，孵育30分钟后，将上述组织悬液自摇床取出，70um级滤网过滤除去未消化组织块，将滤过的细胞悬液加10mlPBS洗涤后，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清，加入5ml裂红液冰上裂解5分钟，再次加10mlPBS洗涤，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清后使用1ml完全培养基重悬；(6)、细胞培养：将上述细胞悬液铺至预先用L‑多聚赖氨酸包被的24孔板2孔，工作浓度10ug/ml，100ul铺孔过夜16小时，第二天1mlPBS反复冲洗3次洗板；加入新的无菌完全培养基，完全培养基采用RPMI 1640配置，含终浓度20％FBS(v/v％)及青霉素/链霉素双抗各100mg/ml，放置培养箱培养：37℃，5％CO2(v/v％)，1.5‑2小时后小心吸取并弃去未贴壁细胞，重新添加4‑5ml完全培养基；隔天换液，定期观察细胞生存情况，细胞长满至70‑80％经胰酶消化后转移至25cm2培养瓶培养传代。