[发明专利]一种利用鸡胚血管系统检测和评价个人护理产品和原料光毒性的方法

摘要

本发明公开了一种利用鸡胚血管系统检测和评价个人护理产品和原料光毒性的方法，包含以下步骤(1)鸡胚卵黄囊血管膜制备；(2)光剂量确定实验；(3)受试物制备；(4)鸡胚光刺激性试验；(5)预测模型和判定；本发明通过标准化的鸡胚为测试系统，其早期发育阶段的血管系统和红细胞对紫外线照射敏感，鸡胚标准化程度高、来源稳定且批间差异小，血管系统具有生物学活性和功能，测试系统简单、廉价，无需特殊设备，检测方法快速、灵敏、通用。本发明可从定性和定量两方面检测和评价个人护理产品和原料光毒性物质的光毒性，本发明方法还可代替活体动物和人类志愿者，直接用于化学品或化妆品等物质光毒性的检测，及其快速筛查、分类和标识。

主权项

一种利用鸡胚血管系统检测和评价个人护理产品和原料光毒性的方法，其特征是包含以下步骤：(1)鸡胚卵黄囊血管膜制备选取SPF级受精鸡胚，制备具有卵黄囊血管膜的受精鸡胚备用；(2)光剂量确定实验取步骤(1)中制备获得的鸡胚，在三个光照剂量强度下照射后，观察卵黄囊血管膜、胚胎发育的变化，将无毒性的光照剂量用于后续刺激性RC50确定试验和光刺激性RC50确定试验；(3)受试物制备选取受试物，用溶剂溶解后，在无血管反应的受试物最高浓度以下，配制一组具有浓度梯度的稀释液，备用，并设置阳性对照和阴性对照；(4)光毒性实验1)预试验取步骤(3)中配制的一组具有浓度梯度的稀释液、阳性对照和阴性对照，分别加入到步骤(1)中制备的鸡胚的卵黄囊血管膜上，恒温培养箱孵育后，观察血管、胚胎存活变化，并与阳性对照和阴性对照相比较，血管的变化按照下表1进行判定和分级，血管反应分级在2分以上者为血管反应阳性；2)无光刺激性RC50UV‑确定试验选取受试物，用溶剂溶解后，在无血管反应的受试物最高浓度以下，选择比预实验更小的稀释因子，重新配制一组具有浓度梯度的稀释液，将该组稀释液、阳性对照和阴性对照，无光照条件下分别加入到步骤(1)中制备的鸡胚的卵黄囊血管膜上，恒温培养箱孵育后，观察血管、胚胎存活变化，并与阳性对照和阴性对照相比较，血管的变化按照下表1进行判定和分级，血管反应分级在2级以上者为血管反应阳性，按对数图计算刺激性RC50的值，简称RC50UV‑，即在无光照射条件下使半数鸡胚出现阳性反应的受试物浓度；3)光刺激性RC50UV+确定试验选取受试物，用溶剂溶解后，在无血管反应的受试物最高浓度以下，选择高于RC50UV‑的一个稀释浓度开始，采用相同的稀释因子制备一组具有浓度梯度的稀释液，将该组稀释液、阳性对照和阴性对照，在光照条件下分别加入到步骤(1)中制备的鸡胚的卵黄囊血管膜上，恒温培养箱孵育后，观察血管、胚胎存活变化，并与阳性对照和阴性对照相比较，血管的变化按照下表1进行判定和分级，血管反应分级在2级及其以上者为血管反应阳性，按对数图计算光刺激性RC50的值，简称RC50UV+，即在有光照射条件下使半数鸡胚出现阳性反应的受试物浓度；表1 光毒性的血管反应观察及分级分级观察描述0观察不到血管褪色或者出血，血管膜正常1血管白色无血液，管壁清晰；或/和毛细血管充血2毛细胞血管可见细小出血点，出血面积＜20％3明显的血管出血，散在或出血区域＞20％，＜50％4严重出血，出血区域超过50％(5)光刺激预测模型和判断按以下公式计算光刺激指数PII＝RC50UV‑/RC50UV+，从浓度‑反应关系计算有光照RC50UV+和无光照片情况下的RC50UV‑；根据上述预测模型得出的光刺激指数，根据以下条件作出光刺激判断：PII＜2：预测“无光毒性”；2≤PII且PIF＜5：预测“可能具有光毒性”；PIF≥5，预测“光毒性”。