[发明专利]一种四氧化三铁免疫纳米磁珠及其制备方法和应用

摘要

本发明是一种四氧化三铁免疫纳米磁珠及其制备方法和应用。一种四氧化三铁免疫纳米磁珠的制备方法，包括以下步骤(1)制备纳米磁珠；(2)纳米磁珠的表面修饰；(3)免疫磁珠的制备。本发明还公布了该四氧化三铁免疫纳米磁珠的应用。本发明所述的一种四氧化三铁免疫纳米磁珠及其制备方法和应用，该制备方法可以不受氮气的限制，并改善了Fe3O4的磁学性质；通过对Fe3O4纳米磁珠表面进行改性，制成磁性高分子微球，与坚果过敏性血清抗体结合制成免疫磁珠，增加了免疫纳米磁珠的种类和制备方法；使免疫磁珠与酶联免疫法结合，无需生物传感器法、质谱仪等昂贵设备，成本低，可以有效检测坚果过敏蛋白，提高预测与评估交叉过敏反应的准确性。

主权项

一种四氧化三铁免疫纳米磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备纳米磁珠：将Fe2+的铁盐和Fe3+的铁盐溶解于水中，得铁盐溶液；所述Fe2+的铁盐中Fe2+和Fe3+的铁盐中Fe3+的摩尔比为1:1‑2；在65‑75℃的温度下，先超声铁盐溶液4‑6分钟，再加入过量的氢氧化钠溶液并搅拌25‑35分钟，再静置晶化2‑3小时，得四氧化三铁沉淀；通过磁分离将四氧化三铁沉淀分离出来，先用蒸馏水洗涤2‑3次，再无水乙醇洗涤2‑3次，得四氧化三铁纳米磁珠无水乙醇混合液；(2)纳米磁珠的表面修饰：将四氧化三铁纳米磁珠无水乙醇混合液用无水乙醇稀释5‑7倍，得稀释后的纳米磁珠无水乙醇混合液；超声振荡稀释后的纳米磁珠无水乙醇混合液25‑35分钟后，加入硅烷化试剂，室温下搅拌6‑8小时，磁分离，得硅烷化四氧化三铁纳米磁珠；所述硅烷化试剂为APTES；用无水乙醇溶液洗涤硅烷化四氧化三铁纳米磁珠2‑3次，得到硅烷化四氧化三铁纳米磁珠无水乙醇混合液；再用PBS缓冲液洗涤硅烷化四氧化三铁纳米磁珠无水乙醇混合液2‑3次，得磁珠混合液；向磁珠混合液中加入戊二醛溶液,室温下振荡交联1.5‑2.5小时，再磁分离，弃去上清液，得氨基化四氧化三铁纳米磁珠混合液混合液；(3)免疫磁珠的制备：用抗体包被氨基化四氧化三铁纳米磁珠混合液混合液，室温下振荡固定1.5‑2.5小时，磁分离，得包被后的氨基化四氧化三铁纳米磁珠混合液，用蒸馏水和PBS缓冲液分别洗涤3‑4次，得四氧化三铁免疫纳米磁珠；所述抗体为坚果过敏小鼠阳性血清。