[发明专利]一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法

摘要

本发明涉及一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，包括制备提取基材，制备提取液，一次离心作业，二次离心作业及提纯等五个步骤。本发明工艺简单，操作简便且操作效率高，一方面可极大的提高多糖多酚小RNA提取做的工作效率和纯度，降低提取作业的工作成本及提取作业中污染性原料的使用量，另一方面本发明实施方法便于掌握，操作控制精度高，可有效的提高多糖多酚小RNA提取作业的规范性和标准型，便于多糖多酚小RNA提取作业技术的交流和经验积累。

主权项

一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的高效植物多糖多酚小RNA提取方法包括以下步骤：第一步，制备提取基材，首先选取生长旺盛且无病虫害的植物组织，将截取的植物组织通过液氮进行冻干，并在‑80℃—‑40℃环境中进行保存从而获得成品提取基材；第二步，制备提取液，将第一步制备的提取基材置于液氮预冷的研磨设备中进行研磨作业，制备得到80—200目的粉末状植物组织，然后将粉末状植物组织添加到CTAB裂解液中并混合均匀，然后将混合物在20℃—40℃环境中静置3—10分钟，且静置后的混合物温度为0℃—10℃；其中研磨作业时，研磨温度不高于‑40℃；第三步，一次离心作业，将第二步制备的混合物防治到离心机上，在0℃—10℃恒定温度下，以10000—22000转/分钟的转速离心操作5—10分钟，然后将离心得到的液体通过真空负压分离设备进行固液分离，然后在分离后的液体中加入Trizol试剂并搅拌均匀后静置1—5分钟，然后在分离后的液体中加入浓度为15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液并搅拌均匀，然后静置10—30分钟；第四步，二次离心作业，将第三步制备的过滤液在0℃—10℃恒定环境下添加到离心机中，并向过滤液中添加入异丙醇，然后由离心机对混合物以10000—22000转/分钟的转速离心操作5—10分钟，然后将混合液在‑40℃—0℃环境中静置1—3小时，然后将混合液温度自然升温至0℃—4℃后，以离心机在10000—22000转/分钟的转速离心操作5—10分钟，然后静置5—10分钟，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物备用；第五步，提纯，向第四步中制备得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，对沉淀物进行清洗，然后将清洗后的沉淀物自然阴干，然后由有机溶剂对干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小RNA。