[发明专利]一种定量检测血清中葡萄糖的方法

摘要

本发明公开了一种快速、灵敏的血清中葡萄糖的定量检测方法。属于生物化学试剂检测领域。该方法先以有机溶剂去除血清中的蛋白质，经过结构中含有硼酸基团和季铵基团化学标记后，采用黑磷辅助激光解吸电离‑飞行时间质谱分析，进而实现血清中葡萄糖的定量检测。该方法操作简单快速，可在5分钟内完成整个实验流程；消耗的样品量少，仅在0.5微升血清中就可实现内源性葡萄糖的检测；结果准确，满足大规模测定样本的要求。

主权项

1.一种定量检测血清中葡萄糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）除蛋白：准确量取0.5微升血清后将其置于200微升离心管中，加入0.5微升，2毫克/毫升的同位素内标[²H₄]葡萄糖，加入1.5微升乙腈除蛋白，然后以12000rpm转速高速离心1 min后取上清液；2）化学标记：向步骤1）除蛋白后的上清液中加入0.5微升，10 mg/mL结构中含有硼酸基团和季铵基团的衍生化试剂，所述的结构中含有硼酸基团和季铵基团的衍生化试剂是2‑（4‑苯硼酸）异喹啉氮鎓溴化物或1‑（4‑苯硼酸）吡啶氮鎓溴化物，然后在700W的微波炉中高火反应3 min；3）制备标准曲线：配制含葡萄糖标准品的溶液，葡萄糖标准品的浓度变化范围为0.02‑50 mmol/L,其中同位素内标[²H₄]葡萄糖固定为5.56 mmol/L，每个浓度的样品做三次平行，按照步骤2）所述进行化学标记后将样品按照浓度从低到高顺序进行黑磷辅助激光解吸电离‑飞行时间质谱分析，以浓度为横坐标，以葡萄糖化学标记产物的峰强对同位素内标[²H₄]葡萄糖化学标记产物的峰强的比值为纵坐标，制得工作曲线；4）检测：将步骤2）中反应后的溶液进行黑磷辅助激光解吸电离‑飞行时间质谱分析，获得血清中葡萄糖化学标记产物与同位素内标[²H₄]葡萄糖化学标记产物的质谱图峰强之比，根据步骤3）的工作曲线计算出葡萄糖的浓度。