[发明专利]一种原代培养犬脐带来源的间充质干细胞的方法

摘要

本发明提供了一种原代培养犬脐带来源的间充质干细胞的方法。所述间充质干细胞来源于新生犬脐带，来源广泛，材料易得，使后期该细胞的大量生产和临床应用成为可能。本培养方法操作简单、重复性好，从中可获得较少的杂细胞和无污染的纯净间充质干细胞。培养方法中使用的胶原酶消化方法温和，对细胞的损害较少，能获得大量的具有较强增殖能力的间充质干细胞，可用于后续该细胞的建系、干细胞特性与治疗疾病等。

主权项

一种原代培养犬脐带来源的间充质干细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：1)新生犬脐带的采集：在幼犬刚从母体生出时用无菌器械剥离胎衣，剪取脐带，立即将脐带放入含10％双抗溶液的PBS缓冲溶液中；2)从脐带中分离出富含间充质干细胞的胶质组织：剪开脐带被膜，暴露出中间的管状结构，剔去动脉和静脉，剩余不含血液的中空乳白色管即为所需的管状组织；3)清洗和剪碎组织块：将分离到的管状组织依次分别置于含10％、5％、1％双抗溶液的PBS缓冲溶液中浸泡5分钟，然后转移到烧杯中，用组织剪将其剪至1mm3大小；4)胶原酶消化：加入约10倍体积的1％Ⅰ型胶原酶，置于37℃培养箱中消化12h以上；5)扩增培养：用脐带间充质干细胞培养液稀释后过200目筛网，1200rpm离心5分钟，弃上清，加脐带间充质干细胞培养液吹打均匀后转移至培养皿中，以5％CO2浓度、37℃环境于培养箱中培养。