[发明专利]一种定量检测古代羊毛的方法

摘要

本发明涉及文物检测领域，公开了一种定量检测古代羊毛的方法：（A）称取标准羊毛样品、待检文物样品各一份，分别标记为样品A和样品B；（B）预处理，备用；（C）提取；（D）透析；（E）质谱检测；（F）分析对比（G）定量分析。本发明方法能够准确判断出待检文物样品是否为古代样品，并且能够定量分析其受损程度。上述方法准确度高，灵敏度强，检测方法简便、合理。

主权项

一种定量检测古代羊毛的方法，其特征在于采用如下步骤：(A)称取标准羊毛样品、待检古代样品各一份，分别标记为样品A和样品B；(B)将样品B在75wt％的乙醇水溶液中常温浸泡30min，然后以2000r/min的速度离心处理4‑6min，取下层物质，用蒸馏水冲洗后常温干燥，备用；(C)将样品A和经步骤(B)处理后的样品B按1∶35‑45的浴比分别添加至处理液中，在200‑300r/min搅拌速率、55‑65℃水浴、惰性气体保护条件下加热搅拌2‑3h，得到提取液；所述处理液由亚硫酸氢钠1.5‑2.5wt％、双氧水0.2‑0.4wt％和余量的水配制而成；(D)将样品A和样品B的提取液冷却至室温，装入截留分子量为3500‑4000的透析袋中，然后完全浸入去离子水中透析2‑3天，透析前12h每2h换一次水，透析12h后每4h换一次水，透析24h后每8h换一次水，透析后经过冷冻干燥，分别得到从样品A、样品B中提取的提取物A和提取物B；(E)将提取物A、提取物B分别溶解到含有脱氧胆酸钠的Tris‑HCl溶液中，再分别添加到二硫苏糖醇溶液中使提取物A、提取物B的浓度达到0.01mol/L，在35‑45℃下反应25‑35min，待冷却至室温后加入碘乙酰胺，在避光条件下反应25‑35min，然后将溶液转移至超滤管中以14000‑16000r/min的速率离心处理8‑12min，加入胰蛋白酶进行酶解，取酶解产物，用C18脱盐柱进行除盐处理，冷冻干燥，分别得到检测样A、检测样B，将检测样A、检测样B分别溶解于0.08‑0.12wt％的甲酸溶液中进行质谱检测；(F)采用HPLC‑MS/MS对检测样A、检测样B进行分析，对分析结果进行对比；对由检测样A、检测样B得到的质谱检测结果进行对比分析，检测样A的检测结果可获得羊毛的一系列肽段，若检测样B的检测结果也获得了同样或者同源的肽段，则判定样品B为古代羊毛；若检测样B的检测结果中没有得到同样或者同源的肽段且与羊毛氨基酸序列库没有相符序列，则判定样品B不是羊毛；(G)若上述检测结果显示样品B为古代羊毛，则采用Label‑free技术对样品A、样品B中的蛋白质进行定量分析，根据样品A、样品B的蛋白质含量的差异，判断古代样品的受损程度。