[发明专利]固相萃取-高效液相色谱-荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物的方法

摘要

固相萃取‑高效液相色谱‑荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物的方法，包括如下步骤，S1、样品的预处理；S2、样品的制备，采用自制固相萃取柱进行固相萃取；S3、标准溶液的配制；S4、标准曲线的绘制：S5、测定：取用S2获得的样品上样，进行HPLC分析，保留时间定性，峰面积定量，醋酸纤维为载体，柚子皮瓤粉作为吸附剂，柚子皮瓤粉均匀分布在醋酸纤维的间隙内，柚子皮瓤粉对尿液中的单胺类神经递质及其代谢物具有优异的灵敏度和选择性，使得人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物富集在柚子皮瓤粉上，大大提高了样品的纯净度和灵敏度，降低了检出限，提高了回收率，提高了检测的效率；成本低廉，可以降低检测成本。

主权项

固相萃取‑高效液相色谱‑荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、样品的预处理：取新鲜人体尿液2ml，加200μl 1mol/L的盐酸溶液将尿液进行酸化处理，随后加入2.0ml 0.5mol/L的乙酸铵，混匀，超声5min后，以5000r/min离心10min，取上清液，经0.45μm滤膜过滤，滤液于4℃冰箱保存待用；S2、样品的制备：将柚子皮瓤烘干粉碎过300～500目筛，得到柚子皮瓤粉，然后柚子皮瓤粉在真空条件下焙烧0.6‑1h，焙烧的温度为300‑550℃，获得柚子皮瓤吸附剂，把香烟过滤嘴内的醋酸纤维填充在SPE玻璃管内，然后再添加柚子皮瓤吸附剂，加上垫片，获得自制固相萃取柱；依次用5ml甲醇、5ml水活化自制固相萃取柱，取上述处理过的尿样4ml上样，流速为1ml/min，依次用2ml 20mmol/L乙酸铵‑甲醇溶液、2ml甲醇淋洗杂质，超声2min后，最后用5ml含2％甲酸的乙腈水溶液(85∶15)洗脱被分析物，流速为1ml/min，所得洗脱液氮吹至近干，用初始流动相复溶至1.0ml，经0.22μm滤膜过滤后，供HPLC分析；S3、标准溶液的配制：准确称取EP、NE、DA、5‑HT、VMA、HVA和5‑HIAA标准品各20mg，分别置于10ml容量瓶中，0.01mol/L的盐酸溶液定容，充分震荡使其溶解，得浓度均为2000μg/ml的标准储备液，保存于4℃冰箱中；S4、标准曲线的绘制：准确吸取EP、NE、DA、5‑HT、VMA、HVA和5‑HIAA7种标准储备液用0.01mol/L的盐酸溶液稀释为EP 30.0μg/ml、NE 50.0μg/ml、DA 50.0μg/ml、5‑HT 20.0μg/ml、VMA 60.0μg/ml、HVA 65.0μg/ml和5‑HIAA 70.0μg/ml的标准应用液，分别准确吸取标准应用液0.01、0.05、0.30、1.00、2.00ml、2.50ml和2.50ml于10ml容量瓶中，初始流动相定容，用HPLC分析，绘制标准曲线；S5、测定：取用S2获得的样品上样，进行HPLC分析，保留时间定性，峰面积定量。