[发明专利]一种基于OCTS技术的髓系白血病CAR-T治疗载体及其构建方法和应用有效
申请号: | 201710392327.1 | 申请日: | 2017-05-27 |
公开(公告)号: | CN107177632B | 公开(公告)日: | 2020-02-07 |
发明(设计)人: | 祁伟;俞磊;康立清;林高武;余宙 | 申请(专利权)人: | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867;C12N15/62;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/02 |
代理公司: | 31325 上海市汇业律师事务所 | 代理人: | 王函 |
地址: | 201201 上海市浦东新区张江*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明公开了一种基于OCTS技术的髓系白血病CAR‑T治疗载体,包括慢病毒骨架质粒、人EF1α启动子(SEQ ID NO.14)、OCTS嵌合受体结构域和PDL1单链抗体;OCTS嵌合受体结构域包括:CD8 leader嵌合受体信号肽(SEQ ID NO.15)、CD33单链抗体轻链VL(SEQ ID NO.16)、CD33单链抗体重链VH(SEQ ID NO.17)、CD123单链抗体轻链VL(SEQ ID NO.18)、CD123单链抗体重链VH(SEQ ID NO.19)、抗体内铰链Inner‑Linker(SEQ ID NO.20)、单链抗体间铰链Inter‑Linker(SEQ ID NO.21)、CD8 Hinge嵌合受体铰链(SEQ ID NO.22)、CD8 Transmembrane嵌合受体跨膜区(SEQ ID NO.23)、TCR嵌合受体T细胞激活域(SEQ ID NO.26)以及嵌合受体共刺激因子区域。此外,本发明还公开了该载体的构建方法及其在制备治疗髓系白血病的药物中的应用。 | ||
搜索关键词: | 一种 基于 octs 技术 白血病 car 治疗 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】:
1.一种基于OCTS技术的髓系白血病CAR-T治疗载体,其特征在于,包括慢病毒骨架质粒、人EF1α启动子、OCTS嵌合受体结构域和PDL1单链抗体;/n所述慢病毒骨架质粒包括:用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列,如SEQ ID NO.1所示;用于质粒复制的原核复制子pUC Ori序列,如SEQ ID NO.2所示;用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40 Ori序列,如SEQ ID NO.3所示;用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件;ZsGreen1绿色荧光蛋白,如SEQ ID NO.11所示;IRES核糖体结合序列,如SEQ ID NO.12所示;用于增强转基因的表达效率的eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件,如SEQ ID NO.13所示;/n所述人EF1α启动子的序列如SEQ ID NO.14所示;/n所述OCTS嵌合受体结构域包括:如SEQ ID NO.15所示的CD8 leader嵌合受体信号肽、如SEQ ID NO.16所示的CD33单链抗体轻链VL、如SEQ ID NO.17所示的CD33单链抗体重链VH、如SEQ ID NO.18所示的CD123单链抗体轻链VL、如SEQ ID NO.19所示的CD123单链抗体重链VH、如SEQ ID NO.20所示的抗体内铰链Inner-Linker、如SEQ ID NO.21所示的单链抗体间铰链Inter-Linker、如SEQ ID NO.22所示的CD8 Hinge嵌合受体铰链、如SEQ ID NO.23所示的CD8 Transmembrane嵌合受体跨膜区、如SEQ ID NO.26所示的TCR嵌合受体T细胞激活域以及嵌合受体共刺激因子区域;所述嵌合受体共刺激因子区域采用如SEQ ID NO.24所示的CD28嵌合受体共刺激因子以及如SEQ ID NO.25所示的CD134嵌合受体共刺激因子组合;/n所述PDL1单链抗体的序列如SEQ ID NO.27所示;/n所述如SEQ ID NO.16所示的CD33单链抗体轻链VL、如SEQ ID NO.17所示的CD33单链抗体重链VH、如SEQ ID NO.18所示的CD123单链抗体轻链VL、如SEQ ID NO.19所示的CD123单链抗体重链VH、如SEQ ID NO.20所示的抗体内铰链Inner-Linker、如SEQ ID NO.21所示的单链抗体间铰链Inter-Linker采用串联连接方式或者转角连接方式;所述串联连接方式具体为:CD123单链抗体轻链VL与CD33单链抗体轻链VL采用单链抗体间铰链Inter-Linker连接,CD123单链抗体轻链VL与CD123单链抗体重链VH采用抗体内铰链Inner-Linker连接,CD33单链抗体轻链VL与CD33单链抗体重链VH采用抗体内铰链Inner-Linker连接;所述转角连接方式具体为:CD33单链抗体轻链VL与CD33单链抗体重链VH采用抗体内铰链Inner-Linker连接,CD123单链抗体轻链VL与CD33单链抗体重链VH采用单链抗体间铰链Inter-Linker连接,CD123单链抗体重链VH与CD33单链抗体轻链VL采用单链抗体间铰链Inter-Linker连接。/n
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