[发明专利]微孔板法测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂抗菌性能的方法

摘要

本发明公开了一种微孔板法测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂抗菌性能的方法。该方法运用酶标仪以OD值作为评价指标，用微孔板法测定红辉沸石分子筛抗菌剂的抗菌性能。以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌为指示菌，测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂对三种菌的最低抑菌浓度和最小杀菌浓度；并测定浓度为6~96mg/mLP型红辉沸石分子筛抗菌剂对上述三种细菌的生长曲线的影响，通过与试管梯度稀释法的比较，微孔板法同样适用于此测定，并且用量少、检测快速。

主权项

一种微孔板法测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂抗菌性能的方法，其特征在于具体步骤为：(1)称取P型红辉沸石分子筛抗菌剂敞开置于超净工作台紫外灭菌，然后加入到无菌液体培养基中，分别配制成浓度为6mg/mL、12mg/mL、24mg/mL、48mg/mL、96mg/mL的梯度浓度抗菌剂；(2)在96微孔板中，取1个微孔作为空白对照孔，加入200µL无菌液体培养基；取1个微孔作为菌液对照孔，加入200 µL待测菌培养液；其余每排微孔作为梯度浓度抗菌剂测定孔，向其中加入200μL步骤(1)配制的梯度浓度抗菌剂，每个浓度加3个微孔，然后再加入10µL待测菌培养液，用封口膜封口，在37℃下以220 r/min的转速振荡培养18 h后观察各个微孔的浊度；(3)分析步骤(2)的观察结果，澄清的微孔表示无细菌生长，浑浊的微孔则表示有细菌生长，以无细菌生长的最小浓度作为P型红辉沸石分子筛抗菌剂的最小抑菌浓度；依次取无细菌生长的各微孔培养物100 µL，涂布于固体培养基上，37℃下培养18h，平板上菌落数小于5个的最大浓度即为P型红辉沸石分子筛抗菌剂的最小杀菌浓度；(4)分别取50mL步骤(1)配制的梯度浓度抗菌剂，每个浓度取3份，并加入100μL已活化的待测菌，同时增加一组空白，然后均置于37℃下以220 r/min的转速振荡培养48h，期间每2 h取菌液200μL，装入96微孔板中，利用酶标仪在630 nm处测定OD值，根据测得数据绘制抗菌剂对待测菌的生长曲线图，即实现微孔板法测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂抗菌性能；所述待测菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌中的一种。