[发明专利]一种胰岛素抵抗状态下子宫内膜增殖培育方法

摘要

本发明涉及一种胰岛素抵抗状态下子宫内膜增殖培育方法，所述方法包括步骤1，胰岛素抵抗动物模型的建立；步骤2，将所述大鼠去势及给予雌激素；步骤3，阴道脱落细胞巴氏染色；步骤4，分离肝脏、内脏脂肪和子宫；步骤5，组织学染色。因此，本发明的子宫内膜增殖培养方法实现了有效和快速的实现子宫内膜增殖培养。

主权项

一种胰岛素抵抗状态下子宫内膜增殖培育方法，其特征在于，所述方法包括：步骤1，胰岛素抵抗动物模型的建立；1.1，将大鼠适应性喂养1周后，编号并随机、平均分为3组：对照组、雌激素组和胰岛素抵抗+雌激素组；1.2，给予对照组和雌激素组正常维持饲料饮食：碳水化合物66％、脂肪10％、蛋白质24％；给予胰岛素抵抗+雌激素组高脂饮食：碳水化合物20％、脂肪60％、蛋白质20％；1.3，喂养大鼠40周，禁食10～12h，内眦静脉取血检测血脂、空腹血糖及胰岛素水平，计算HOMA‑IR指数，腹腔注射葡萄糖后于30min、60min、90min和120min尾静脉取血测定血糖值并计算血糖曲线下面积；1.4，测定葡萄糖耐量1周后，大鼠禁食7h，尾静脉取血测空腹血糖，腹腔注射胰岛素，测定30min、60min、90min和120min血糖值并计算曲线下面积；步骤2，将所述大鼠去势及给予雌激素；2.1，大鼠取仰卧位，消毒腹部后用50mg/kg(体重)戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，于尿道口上方1cm处向上行正中纵形切口皮肤3cm，分离皮下组织及肌肉进入腹腔，在子宫角与输卵管交界靠子宫角侧结扎，摘除大鼠双侧卵巢后关闭腹腔，对照组仅切开皮肤暴露腹腔取出与卵巢等量的脂肪组织后关闭腹腔；2.2，术后1周，灌胃给予雌激素和胰岛素抵抗+雌激素组大鼠17β‑雌二醇4周，对照组给予等量溶剂橄榄油；步骤3，阴道脱落细胞巴氏染色；3.1，给予溶剂或17β‑雌二醇3天后，每天行阴道涂片后行如下步骤：95％酒精5min，碳酸锂溶液5min，95％酒精5min，橘黄染液3min，95％酒精Ⅰ、Ⅱ各5min，EA‑50 5min，95％酒精Ⅰ、Ⅱ各5min，无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5min，中性树胶封片；步骤4，分离肝脏、内脏脂肪和子宫；4.1，给予溶剂或17β‑雌二醇4周，用50mg/kg(体重)戊巴比妥钠麻醉大鼠后再次暴露其腹腔，分离腹腔脂肪并称重，分离子宫并称量子宫的湿重和干重后，取子宫角中段8～10mm和5mm×5mm×5mm肝脏固定于10％中性福尔马林中用于HE染色，观察肝脏脂肪样变和子宫上皮鳞状化生，测量子宫腔上皮细胞和腺上皮细胞高度、固有层和肌层的厚度；4.5，剩余组织经液氮迅速冷冻后置于‑80℃冰箱保存，断颈处死大鼠。步骤5，组织学染色；5.1，固定于10％中性福尔马林中的肝脏和子宫组织经石蜡包埋、切片、烤片后脱蜡入水，苏木精染色后盐酸酒精分化至切片呈粉红色，氨水返蓝后，伊红染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明处理，中性树胶封片。