[发明专利]一种适于枣染色体倍性测定的细胞核悬浮液快速制备方法

摘要

本发明涉及一种适于枣染色体倍性测定的细胞核悬浮液快速制备方法。采集幼嫩叶片，用超纯水清洗数次，放入预冷的培养皿中，加入预冷的Tris‑MgCl₂裂解液，用刀片迅速切碎，再加入预冷的裂解液，混匀后静置数分钟，用纱布过滤进入离心管中，加入RNA酶及PI染液，低温避光，得到细胞核悬浮液；利用流式细胞仪测定，通过计算目标峰的荧光强度获得倍性关系。本方法改进了枣染色体样本制备及倍性鉴定中的多个环节，简单、快速、准确、成本低，可用于大批量枣染色体倍性的快速检测。该方法还适用于酸枣和毛叶枣等枣属植物。

主权项

1.一种适于枣染色体倍性测定的细胞核悬浮液快速制备方法，其特征在于具体包括以下几个步骤：（1）样品的采集及保存：采集幼嫩的叶片，置于‑20~4℃条件下保存；（2）Tris‑MgCl2裂解液的配制：取2.422g Tris‑HCl、0.0813g MgCl2·6H2O于100mL容量瓶中，加入0.5mL的Triton‑100，用超纯水定容，利用NaOH调节pH值至7.0‑7.5，即得Tris‑MgCl2裂解液；（3）PI染液的配置：取1mg PI染料融于1mL的超纯水或PBS缓冲溶液中，得PI染液；（4）细胞核悬浮液的制备：选取幼嫩叶片2~4片，用超纯水清洗1~3次，放入4℃预冷的培养皿中，加入1mL 4℃预冷的Tris‑MgCl2裂解液，用刀迅速切碎叶片，再加入1mL 4℃预冷的Tris‑MgCl2裂解液，混匀后静置1~10 min，用500目纱布过滤进入离心管中，加入约1μL 浓度为10mg/mL的RNA酶及10~30μL 1mg/mL的PI染液，置于4℃条件下避光4~30 min，得细胞核悬浮液；（5）倍性鉴定：细胞核悬浮液用流式细胞仪测定倍性，通过计算目标峰的荧光强度获得倍性关系。