[发明专利]一种DNA折纸生物色谱柱的制备方法及其在药物筛选中的应用

摘要

本发明涉及DNA折纸生物色谱柱的制备方法及其在药物筛选中的应用，可有效解决现有技术中药物筛选准确性不高、过程复杂的问题，方法是，活化硅胶及制备羧基化硅胶，将靶点用长度为10~30 bp的单链DNA修饰，将M13mp18 ssDNA、216条订书钉链、靶点化合物投料于PCR仪中，以6℃/min的速率从60℃降到35℃，即得到组装有靶点化合物的氨基化的DNA折纸，将羧基化硅胶分散于PBS溶液中，加入DCC与NHS混匀，再加入组装了靶点化合物的氨基化的DNA折纸，室温搅拌，用PBS溶液及超纯水洗涤，真空干燥，然后装柱，匀浆液和顶替液为PBS缓冲液，即得到DNA折纸生物色谱柱，本发明使用简便、高效、准确性高，充分发挥药物作用。

主权项

1.一种DNA折纸生物色谱柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）、活化硅胶及制备羧基化硅胶：将硅胶置于体积浓度为20%的盐酸中回流5‑7 h，再用水洗至中性，在真空干燥箱中，于55‑65℃下真空干燥12‑18 h，成活化硅胶，将活化硅胶置于无水甲苯中，加入γ‑氨丙基三乙氧基硅烷中，氮气保护下，100‑120℃回流22‑26 h，用甲苯及乙醚分别洗涤3次，于真空干燥箱中55‑65℃干燥12‑18 h，成氨基化硅胶，将氨基化硅胶超声分散于30 mL四氢呋喃中，加入与γ‑氨丙基三乙氧基硅烷等摩尔比的丁二酸酐，室温搅拌24 h，用无水乙醇洗涤3~5次，于真空干燥箱中55‑65℃干燥12‑18 h，成羧基化硅胶，所说的硅胶粒径：5 µm，孔径：100‑300 Å；（2）、DNA折纸组装靶点：将靶点用长度为10~30 bp的单链DNA修饰，即靶点化合物含有一段游离的DNA链，订书钉链有216条，其中12条订书钉链的5′端用一段游离的单链DNA修饰，与靶点化合物上的修饰DNA链互补，3~5条订书钉链的5′端用氨基修饰，将M13mp18 ssDNA、216条订书钉链、靶点化合物按1:(5‑10):1的摩尔比投料于PCR仪中，通过退火以6 ℃/min的速率从60℃降到35℃，即得到组装有靶点化合物的氨基化的DNA折纸纳米结构，所述的靶点为蛋白质、生物酶、膜受体、核受体及其他靶点化合物；（3）、组装靶点的DNA折纸键合羧基化硅胶：将步骤1制备的羧基化硅胶超声分散于pH值为7.2‑7.4的PBS溶液中，加入6 mg DCC与5 mg NHS混匀，再加入组装了靶点化合物的氨基化的DNA折纸4 mg，于室温下搅拌22‑26 h，用pH值为7.2‑7.4的PBS溶液及超纯水分别洗涤3次，于真空干燥箱中55‑65℃干燥12‑18 h，得DNA折纸生物色谱介质；（4）、装柱制成DNA折纸生物色谱柱：取不锈钢液相色谱柱，在10~20 MPa下，将步骤3制备的DNA折纸生物色谱介质进行装柱，装柱用的匀浆液和顶替液均为pH值为7.2‑7.4的PBS缓冲液，即得到DNA折纸生物色谱柱，所述的不锈钢液相色谱柱内腔直径为4.6 mm，长为150 mm。