[发明专利]一种基于纳米脂肪基质细胞修复再生注射物的制备方法

摘要

本发明公开了一种基于纳米脂肪基质细胞修复再生注射物的制备方法。制备方法通过1)纳米脂肪基质细胞的提取与纯化；2)富血小板纤维蛋白析出液的提取与储存；3)将纳米脂肪基质细胞、富血小板纤维蛋白析出液与氨甲环酸、维生素C、还原型谷光甘肽5种成分按一定比例制备注射物。本发明的有益效果：1.本发明方法安全性可靠，且效果显著。2.本发明方法为脂肪干细胞应用于组织工程、再生医学研究及其在临床上促进创伤修复、组织再生及美容抗衰老等治疗提供可靠的理论依据。

主权项

一种基于纳米脂肪基质细胞修复再生注射物的制备，其特征在于，制备方法包括以下步骤：1)纳米脂肪基质细胞的提取与纯化选取大腿上段内外侧或下腹部为供区，用手持20ml针筒预留空气法低负压抽取，根据患者情况，选定脂肪供区位置后，局部肿胀液浸润麻醉，采用自行设计的多孔专用吸脂针由深层向浅层呈扇形反复抽吸；将抽吸出来的脂肪颗粒用生理盐水冲洗备用；采取低速离心方法获取并纯化脂肪颗粒，离心转速600rpm/min，离心时间2min，操作过程全程遵循无菌密闭操作原则，尽量减少脂肪组织与空气的接触时间；将纯化后的脂肪颗粒经机械捣碎乳化法制备富含脂肪干细胞的纳米脂肪基质细胞，将脂肪颗粒经孔径0.5mm的滤网过滤，随后将颗粒脂肪经2个20mL注射针筒连接纳米脂肪专用乳化器快速对打30次，机械乳化，然后用0.5mm孔径的滤网再次过滤，最后经转速为8000rpm/min离心，离心时间为5min，高速离心去除油脂后得到的脂肪乳化液即为纳米脂肪，这部分乳化后的纳米脂肪携带有较多的基质血管成分和脂肪干细胞；有利于损伤或老化皮肤组织的修复与再生；2)富血小板纤维蛋白析出液的提取与储存抽取步骤1)的同一个体的适量静脉血20ml，分装于无菌负压试血管内，采用一次高速离心法，转速为2700rpm/min，离心时间为12min提取富含细胞因子的凝胶状物质，静置5min，得到富血小板纤维蛋白凝胶，此时血液分3层，最上层：贫血小板血浆，为淡黄色透明清亮液体；中间层：富血小板纤维蛋白，为淡黄色凝胶状物质；最下层：红细胞碎片，为暗红色物质，排出其中多余的红细胞；将富血小板纤维蛋白单独提取出来，放置于无菌试管，在4℃冰箱中储存7d后，再提取其中的析出液备用；同时对富血小板纤维蛋白在1～28d时间段内进行细胞因子释放浓度的检测；3)将纳米脂肪基质细胞、富血小板纤维蛋白析出液与氨甲环酸、维生素C、还原型谷光甘肽5种成分依次按10％:3％:3％:1％:1％质量比例制备注射物，放置于4℃冰箱中储存备用。