[发明专利]一种基于荧光染色观察的农药降解菌活性检测方法

摘要

本发明提出的是一种基于荧光染色观察的有机农药降解菌活性检测方法，具体包括以下步骤：（1）针对降解菌进行扩大培养；（2）配置n组含不同活菌死菌比例的培养体系；（3）计算活菌荧光和死菌荧光比值；（4）通过降解实验测定n组菌液的农药降解活性；（5）绘制荧光比值与降解活性的相关性曲线，建立降解菌活性计算公式；（6）用未知活性菌液验证公式准确性后用于后续测试。优点：1）荧光观察能直观的反映体系中降解菌株的活性状态；2）检测用时短、费用低、方便简单；3）可以对降解菌活性进行实时快速检测，具有时效性；4）适用范围广。

主权项

1.基于荧光染色观察的有机农药降解菌活性检测方法，其特征是包括以下步骤：（1）针对降解菌进行扩大培养；（2）配置n组含不同活菌死菌比例的培养体系；（3）计算活菌荧光和死菌荧光比值；（4）通过降解实验测定n组菌液的农药降解活性；（5）绘制荧光比值与降解活性的相关性曲线，建立降解菌活性计算公式；（6）用未知活性菌液验证公式准确性后用于后续测试；所述步骤（1）针对降解菌进行扩大培养：针对某种降解菌，准备相应培养基，培养基灭菌后，接种降解菌进行扩大培养，利用分光光度计设置波长OD600检测培养过程降解菌的生长情况；所述步骤（2）配置n组含不同活菌死菌比例的培养体系：在降解菌生长达到稳定期后，取两份等量的菌液，其中一份进行高温灭活，将摇匀后的活菌液与灭活菌液以不同比例配比，形成n组培养体系，各培养体系中的活菌占总菌的百分比在0%‑100%间均匀分布，为确保方法准确性，每组至少三个重复，所述n≥6；所述步骤（3）计算活菌荧光和死菌荧光比值：培养体系配置结束后，摇匀并立即取少量不同培养体系中的菌液，菌液经荧光染料染色后在荧光显微镜下镜检，所用荧光染料能够区分活菌和死菌，在不同激发波长下，染色后的活菌和死菌的荧光显色不同，拍照后利用图像处理软件分析视野中不同荧光光密度值，代表不同培养体系中活菌和死菌荧光强度比值；所述步骤（4）通过降解实验测定n组菌液的农药降解活性：首次镜检后，向各培养体系中加入同样浓度的有机农药作为降解菌的底物，分时段取样分析各培养体系中农药残留量，在活菌占100%的培养组的有机农药残留量小于30%时终止降解实验，分析各培养体系中的的农药降解率；所述步骤（5）绘制荧光比值与降解活性的相关性曲线，建立降解菌活性计算公式：以n组培养体系中活菌和死菌荧光强度比值为横坐标，对应各组的农药降解率为纵坐标，荧光强度和农药降解率均为同组三个重复的平均值，选择合适的曲线对二维平面中数据点进行拟合，绘制降解菌活性测试标准曲线，建立降解菌活性计算公式；所述步骤（6）中用未知活性菌液验证公式准确性：对于绘制的降解菌活性测试标准曲线的准确性进行验证，验证方法为对未知活菌百分比的培养液取样进行荧光染色观察，同时测试培养液中降解菌的活性，通过比较降解菌活性测试标准曲线计算的降解菌活性与实际测得的活性，验证降解菌活性测试标准曲线的准确性。