[发明专利]一种利于膜酶镶嵌及其活性研究的酶-磷脂微囊制备方法

摘要

本发明公开了一种利于膜酶镶嵌及其活性研究的酶‑磷脂微囊制备方法，包括以下步骤：S1、磷脂微粒的制备：(1)把40mg丙酮洗过的大豆磷脂，悬浮在1ml缓冲液中，并加入胆酸钠至终浓度为2％；(2)冰上超声波处理；S2、酶蛋白质嵌入磷脂微囊：(1)准备酶溶液；(2)往酶溶液中加胆酸钠溶液至终浓度为0.5％；(3)加入S1得到的磷脂微粒，使酶蛋白和磷脂的质量比为1:40；(4)在冰上孵育30分钟；(5)在冰上进行过夜透析。本方法形成的是大单层微囊，其体积大，并且具有良好的稳定性，膜的流动性好，有利于膜酶蛋白的嵌入，适合于研究各种膜酶的活性和功能。

主权项

1.一种利于膜酶镶嵌及其活性研究的酶‑磷脂微囊制备方法，其特征在于，主要包括以下步骤：S1、磷脂微粒的制备：(1)把40mg丙酮洗过的磷脂，悬浮在1ml缓冲液中，并加入胆酸钠至终浓度为2％，过程中控制温度27～28℃；(2)冰上超声波处理5分钟，超声处理时，要不断的通入氩气，以保证无氧环境；(3)静置5分钟后，再超声处理5分钟；S2、酶蛋白质嵌入磷脂微囊：(1)准备酶溶液300μl，其中酶蛋白含量为1～2mg/ml；将所述酶溶液置于‑60℃快速冷冻，水浴30℃中融化，交替冻融3～5次，每次冻融后均用匀浆机高速匀浆处理；(2)往酶溶液中加胆酸钠溶液至终浓度为0.5％，过程中控制温度27～28℃；(3)加入S1制备得到的磷脂微粒，使酶蛋白和磷脂的质量比为1:40；(4)在冰上孵育30分钟；向孵育后的溶液中加入质量百分浓度为5.0～10.0％海藻酸钠与质量百分浓度为4.5～6.0％二硫苏糖醇混合溶液，最终使海藻酸钠的质量百分浓度为0.5～3％，二硫苏糖醇的质量百分浓度为0.3～2％，颠倒混匀后再置于冰上进行二次孵育30～50min；(5)在冰上或冷室中透析4小时，透析液体积为酶溶液体积的100倍，透析过程中不断搅拌；(6)用200倍体积的缓冲液继续过夜透析，中间更换一次透析液；(7)用光学显微镜或电子显微镜检查微囊的大小；(8)除菌，4℃密封保存。