[发明专利]一种快速分析蜂花粉中脂类成分的方法

摘要

本发明涉及一种快速分析蜂花粉中脂类成分的方法。利用超高效反相液相色谱与四级杆‑静电场轨道阱高分辨质谱联用技术(UPLC‑Q‑Exactive Orbitrap MS)，并利用正负离子监测模式、全扫描及自动触发二级质谱扫描的功能，准确实现不同植物来源蜂花粉中脂类物质的精确定量，为蜂花粉产地溯源、真实性判别、掺杂打假以及蜂花粉的功能营养学研究提供依据。该技术分辨率高，定性准确，克服了以往技术在成分鉴别中准确度和可靠性低的问题，是一种脂质组学分析的新型高效技术。

主权项

1.一种快速分析蜂花粉中脂类成分的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)样品预处理/n称取蜂花粉，研磨粉碎后加入花粉脂质提取液，涡旋、静置后离心，静置，分层后取下层有机相；所述花粉脂质提取液为氯仿与甲醇按体积比2:1的混合溶液；并按花粉和氯仿甲醇混合液比，即料液比1:4～1:8加入；/n向有机相加入去离子水，萃取涡旋，静置，抽提后离心，取下层有机相，氮气吹干，得到透明薄膜，重溶于花粉脂质提取液，待测；/n(2)利用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对样品进行定性和定量分析；/n超高效反相液相色谱的流动相包括：A组分乙腈和水，B组分异丙醇和乙腈；/n所述超高效反相液相色谱的梯度洗脱为：/n0-20min，A组分由63％降至2％，B组分由体积百分比37％增至98％；/n20-28min；按体积百分比计：2％A，98％B；/n28-28.1min，A组分由体积百分比2％降升至63％，B组分由体积百分比98％降至37％；/n28.1-35min；按体积百分比计，63％A，37％B；洗脱速度为150-300μL/min；/n进样量：1-2μL；/n所述超高效反相液相色谱的其他检测条件：/n采集模式：正、负离子采集模式；/n离子源：电喷雾离子源；温度：200-350℃；/n扫描方式：数据依赖型二级扫描；/n碰撞能量：10-50eV；/n色谱柱：反相色谱柱；/n进样量：1-2μL；/n毛细管温度：200-350℃；喷雾电压：2-3.0kV；鞘气流速：30-35Arb；辅助气流速：0-10Arb；/n采集范围：正离子模式下240-2000m/z，负离子模式下200-2000m/z；/n(3)利用软件Lipidsearch 4.0进行数据分析，基于一级母离子和二级碎片离子信息进行数据库检索，自动匹配保留时间，准确质量数，鉴定样品中的脂类成分；再根据标准溶液浓度曲线定量分析样品中脂类成分的含量；/n所述脂类成分为：神经酰胺、溶血性卵磷脂、甘油三酯、甘油二酯、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸和脂肪酸。/n