[发明专利]一种磁分离RCA合成DNA酶检测金黄色葡萄球菌的方法

摘要

本发明公开了一种磁分离RCA合成DNA酶检测金黄色葡萄球菌的方法，属于食品安全技术领域。本发明方法，将金黄色葡萄球菌的16S rDNA为一段特异性检测的目标DNA片段，使用特异性探针修饰的磁纳米粒子来结合和分离金葡菌的16S rDNA，不仅利用磁纳米粒子的磁性分离作用，还利用探针和金葡菌16S rDNA间特异性的互补配对作用，从而快速地从复杂组分中分离金葡菌16S rDNA，并有效结合滚环扩增技术合成的DNA酶催化H2O2‑鲁米诺反应系统来实现信号的双重放大和检测。本发明方法，提高了检测的准确性、特异性、灵敏度，对金黄色葡萄球菌的检测限达到4.2×101CFU/mL。

主权项

一种检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)先将捕获探针与亲和素修饰的磁纳米粒子混匀、孵育，使捕获探针修饰到磁纳米粒子表面，得到捕获探针功能化的磁纳米粒子；所述捕获探针功能化的磁纳米粒子能够结合金黄色葡萄球菌的目标DNA序列；(2)将捕获探针功能化的磁纳米粒子与含目标DNA序列的待测液孵育，然后加入信号探针，使目标DNA序列与捕获探针、信号探针生成夹心结构；所述信号探针上包含滚环扩增引物；(3)加入滚环扩增模板，然后滚环扩增引物与相应包含DNA酶互补序列的模板互补配对引发滚环扩增反应合成DNA酶；(4)利用DNA酶进行催化H2O2‑鲁米诺化学发光反应系统，根据相对发光值的变化来定量检测金黄色葡萄球菌。