[发明专利]一种基于定量PCR技术的GSTT1分型检测方法

摘要

本发明公开了一种基于定量PCR技术的GSTT1分型检测方法，采用GSTT1基因特异性的引物SEQ1和SEQ2扩增GSTT1基因片段，同时在GSTT1基因特异性的引物界定的扩增区域内设计GSTT1基因特异性TAQman探针SEQ3‑Fam；采用ALbumin特异性的PCR引物SEQ4和SEQ5扩增ALbumin基因片段，同时在ALbumin基因特异性的引物界定的扩增区域内设计ALbumin基因特异性TAQman探针SEQ6‑Vic。可以有效预防PCR产物污染，避免有毒DNA染色剂污染，可以大大简化检测与结果分析过程，提高检测通量。

主权项

一种基于定量PCR技术的GSTT1分型检测方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）采用二代测序验证的人GSTT1正常纯合子、杂合子和缺失纯合子基因组DNA作为相应对照物；（2）采用GSTT1基因特异性的引物SEQ1和SEQ2扩增GSTT1基因片段，同时在GSTT1基因特异性的引物界定的扩增区域内设计GSTT1基因特异性TAQman探针SEQ3‑Fam；若存在GSTT1基因，则GSTT1基因特异性TAQman探针SEQ3‑Fam释放FAM荧光信号而被定量PCR仪器检到；若没有GSTT1片段，则无GSTT1扩增，无FAM荧光信号释放；（3）采用ALbumin特异性的PCR引物SEQ4和SEQ5扩增ALbumin基因片段，同时在ALbumin基因特异性的引物界定的扩增区域内设计ALbumin基因特异性TAQman探针SEQ6‑Vic；若存在合格样本，则有ALbumin扩增，释放Vic荧光信号，定量PCR仪器检测到Vic荧光信号；若样本不合格，则样本无ALbumin扩增，无Vic荧光信号释放；（4）对比扩增FAM/VIC信号确认待检测样本基因型；所述引物SEQ1的核苷酸序列号如下：TCTGTGGTCCCCAAATCAGA；所述引物SEQ2的核苷酸序列号如下：CTGTGGGGAAAAGGGTACAG；所述GSTT1基因特异性TAQman探针SEQ3‑Fam的核苷酸序列号如下：Vic‑5´‑TGCTGCCCATCCCTGCCCTCACAACCA；所述引物SEQ4的核苷酸序列号如下：5´‑ACTCCAAACCTGATGCTTCT‑3´；所述引物SEQ5的核苷酸序列号如下：5´‑CCTTAGGGCAGAATTATCCA‑3´；所述ALbumin基因特异性TAQman探针SEQ6‑Vic的核苷酸序列号如下：FAM‑5´‑CAGCCTGTTGCCCCTTTTAGAGTTCCTTTT‑3´。