[发明专利]一种柱层析方法分离牛初乳中过敏因子β‑乳球蛋白

摘要

本发明公开了一种柱层析方法分离牛初乳中过敏因子β‑乳球蛋白,包括如下步骤S1、新鲜牛初乳去除酪蛋白，新鲜牛初乳经过1500‑2000转/分离心10‑30分钟，除去杂质、脂肪，分装保存备用；取除去杂质和脂肪的牛初乳原料，用1Mol/L的HCL调节pH值范围4.0‑5.0，离心力为1000g‑5000g，得到除去酪蛋白的乳清液；本发明柱层析方法分离牛初乳中过敏因子β‑乳球蛋白，价格低廉的工业化常用的强酸性阳离子交换树脂D72，适于大规模化生产应用；酸性乳清液直接上样，不需加碱调节pH至中性，避免盐浓度提高；用磷酸缓冲液（PB缓冲液）处理树脂，提高了对过敏因子β‑乳球蛋白的吸附专一性；提高了初乳中免疫球蛋白的纯度，提高了牛初乳的品质。

主权项

一种柱层析方法分离牛初乳中过敏因子β‑乳球蛋白,其特征在于：包括如下步骤：S1、新鲜牛初乳去除酪蛋白新鲜牛初乳经过1500‑2000转/分离心10‑30分钟，除去杂质、脂肪，分装保存备用；取除去杂质和脂肪的牛初乳原料，用1Mol/ L的HCL调节pH值范围4.0‑5.0，离心力为1000g‑5000g，得到除去酪蛋白的乳清液；结果：调节除去杂质、脂肪的牛初乳pH值在4.2‑4.6之间， 1200g低速离心可以去除酪蛋白；S2、 离子交换法除去β‑乳球蛋白强酸性阳离子交换D72树脂的清洗处理：首先用自来水浸泡D72树脂，布氏漏斗抽滤；再用自来水复悬，抽滤；直至将D72树脂清洗干净；复悬装柱，2‑5倍柱床体积的0.5‑3.0Mol/LHCL、5‑10倍柱床体积蒸馏水、2‑5倍柱床体积的0.1‑0.5Mol/LNaOH、5‑10倍柱床体积的蒸馏水处理离子交换树脂和层析柱；强酸性阳离子交换树脂D72的平衡缓冲液：经过比较，采用磷酸缓冲液（PB）作为平衡缓冲液平衡D72树脂层析柱，可以提高对β‑乳球蛋白的吸附作用，从而达到除去牛初乳中过敏因子β‑乳球蛋白，提高免疫球蛋白纯度的目的；强酸性阳离子交换D72树脂对乳清液中免疫球蛋白IgG和β‑乳球蛋白的分离效果：用上述平衡液平衡D72树脂层析柱，直接上样pH4.2‑4.6的乳清液，分段收集流穿液；分析收集组份，主要成分为免疫球蛋白IgG,未检测到β‑乳球蛋白，说明其被吸附在D72树脂上；用磷酸盐缓冲液（PBSpH7.0‑7.6/0.01‑0.05MOL/LPB+0.2‑1.2Mol/LNaCL）洗脱D72树脂吸附的蛋白质，收集洗脱液，分析收集的洗脱液主要成分为β‑乳球蛋白；结论：D72树脂经PB平衡，直接上样经等电点沉淀离心所得的牛初乳酸性乳清液，可专一性地吸附其中的过敏成分β‑乳球蛋白，同时收获流穿液中纯度提高的免疫球蛋白IgG,提高了牛初乳的品质。