[发明专利]一种离子缔合物荧光淬灭测定胰岛素中锌含量的方法

摘要

一种离子缔合物荧光淬灭测定胰岛素中锌含量的方法，涉及药物分析领域，在容量瓶中，分别加入供试品溶液或不同体积的锌标准溶液，分别加入0.50mL 1mg/mL的碘化钾溶液，放置5分钟后，加一滴甲基红指示剂，用0.2mol/L氨水溶液调节溶液颜色由红色刚好变为黄色，再分别加2mL pH值为7.2的磷酸盐缓冲溶液；最后加入2.0mL 0.025％的罗丹明6G溶液，加水稀释至刻度，配制成待测溶液和系列工作溶液；扫描工作溶液及待测溶液的EEM谱图，并记录554nm处的荧光强度，绘出荧光强度对锌浓度的标准曲线，利用外标法计算胰岛素中锌含量。本发明是利用锌离子使罗丹明6G‑碘化钾体系的荧光强度呈线性降低的关系测定胰岛素中锌含量，操作简单、设备简易、检测快速、准确、灵敏度高。

主权项

一种离子缔合物荧光淬灭测定胰岛素中锌含量的方法，具体包括以下步骤：(1)供试品溶液配制：称取胰岛素样品，经过炭化和灰化处理后，用2mol/L的盐酸溶液溶解残渣，然后转移至容量瓶中，用水定容，作为供试品溶液待用；(2)锌标准溶液配制：量取浓度为1.0mg/mL的锌单元素标准溶液，用0.01mol/L盐酸稀释成1.0mg/L的锌标准溶液；(3)绘制标准曲线：分别吸取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL和5mL浓度为1.0mg/L的锌标准溶液于六个25mL容量瓶中，分别加入0.50mL 1mg/mL的碘化钾溶液，放置5分钟后，分别加一滴甲基红指示剂，用0.2mol/L氨水溶液调节溶液颜色由红色刚好变为黄色，再分别加入2mL pH＝7.2的磷酸盐缓冲溶液，最后分别加入2.0mL 0.025％的罗丹明6G水溶液，加水稀释至刻度，摇匀，配制成锌浓度分别为0.00mg/L、0.04mg/L、0.08mg/L、0.16mg/L、0.20mg/L的工作溶液；设定激发波长为365nm、发射波长为400～800nm，扫描各工作溶液并生成EEM谱图，记录各工作溶液在554nm处的荧光强度，绘制荧光强度与锌离子浓度关系标准曲线；(4)测量供试品溶液中锌的含量：在25mL容量瓶中，加入5mL供试品溶液，加入0.50mL 1mg/mL的碘化钾溶液，放置5分钟后，加一滴甲基红指示剂，用0.2mol/L氨水溶液调节溶液颜色由红色刚好变为黄色，再加2mL pH＝7.2的磷酸盐缓冲溶液，最后加入2.0mL 0.025％的罗丹明6G水溶液，加水稀释至刻度，摇匀，作为待测溶液；设定激发波长为365nm、发射波长为400～800nm，扫描待测溶液并生成EEM谱图，记录待测溶液在554nm处的荧光强度，通过标准曲线找到所测荧光强度对应的锌离子浓度值，即为待测溶液的锌离子浓度；(5)计算胰岛素样品中锌的含量：根据供试品溶液的配制过程换算为胰岛素样品中锌的含量。