[发明专利]用于神经逆向示踪的CTB‑AuNDs复合物、制备方法及其应用

摘要

一种用于神经逆向示踪的CTB‑AuNDs复合物、制备方法及其在神经逆向示踪方面的应用，属于荧光金纳米材料技术领域。本发明首先制备用于神经逆向示踪的红色荧光金纳米点，其具有高荧光效率，高稳定性和低毒性；进一步将红色荧光Au纳米点与无细胞毒性的霍乱毒素B亚基(CTB)相连接，形成CTB‑AuNDs复合物。CTB‑AuNDs复合物产物具有荧光效率高、稳定性优良，表现出良好的光学性质和水溶性，特别是具有靶向神经的功能。将这种复合物注射入大鼠的坐骨神经处，其能够靶向性地与神经细胞的细胞膜发生特异性结合，并沿着细胞膜逆向传输，并且金纳米点的荧光性质可在大鼠体内神经部位长时间保持。这种兼具高稳定性、特异性结合细胞膜的CTB‑AuNDs，可以作为一种逆向神经示踪剂，用于示踪神经细胞。

主权项

一种用于神经逆向示踪的CTB‑AuNDs复合物的制备方法，其步骤如下：1)在浓度为0.1～500mmol/L的含有巯基的水溶性化合物作稳定剂的水溶液中，加入与含有巯基的水溶性化合物等摩尔的Ag+离子的水溶液，常温搅拌10～30min后，加入1mol/L NaOH溶液，调节pH至5～8，至溶液无色透明；再向上述溶液中加入水合肼作为还原剂，水合肼与Ag+离子的摩尔比为1～10：1；然后在常温下搅拌12h～48h，反应结束后，向溶液中加入异丙醇作为沉淀剂，沉淀离心后得到的固体产物即为Ag纳米点，然后将Ag纳米点分散在水溶液中；2)在浓度为10～500mmol/L的Ag纳米点水溶液中加入浓度为10～500mmol/L的Au3+的水溶液，Ag+与Au3+的摩尔比为1～2：1；再加入1mol/L NaOH溶液，调节pH至5～11，然后在60～100℃下搅拌2～8小时，反应结束后离心，向清液中加入异丙醇作为沉淀剂，沉淀离心后得到的固体产物即为红色荧光Au纳米点，将Au纳米点分散在水溶液中；3)将神经靶向试剂霍乱毒素B亚基粉末溶解于含有0.2M NaCl、3mM NaN3、1mM EDTA的Tris缓冲溶液中，使其浓度达到0.1～100mg/mL；在4℃环境下，将上述溶液用3500分子量的渗析袋渗析3～5天，以除去溶液中的金属离子；在浓度为0.01～100mg/mL的红色荧光Au纳米点溶液中加入浓度为0.1～10mg/mL EDC的Tris溶液，以及浓度为0.1～10mg/mL NHS的Tris溶液，搅拌30～50min；最后加入上述含有神经靶向试剂的溶液，在摇床上室温反应4h～24h；将所得产物用3500分子量的渗析袋在4℃下渗析5～10天，以除去体系中的小分子；将渗析后的溶液冻干，并分散于Tris缓冲液中，得到CTB‑AuNDs复合物，即能够特异性结合神经细胞的神经示踪剂；Au3+与EDC的摩尔比为10～100：1，Au3+与NHS的摩尔比为10～100：1，神经靶向试剂霍乱毒素B亚基与Au纳米点的质量比为0.05～50：1。