[发明专利]一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法

摘要

一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法，包括步骤(1)，将低温保存的金龟子绿僵菌(Metarhizium guizhouense)菌种进行种子培养；步骤(2)，摇瓶培养菌种；步骤(3)，初步发酵；步骤(4)，深度发酵；步骤(5)，制备菌悬液；步骤(6)，将步骤(5)得到的菌悬液与辣根素、百菌清、柠檬酸以及印楝素混合均匀，干燥即得所述的长效生物杀线虫组合物。本发明采用了具有优异杀线虫剂能力的金龟子绿僵菌，并在制备过程中，将其菌液吸附于活性炭上，部分菌液吸附于活性炭孔道内部，施用后缓慢释放，使得本发明具备长效杀线虫作用。

主权项

一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法，其特征在于，包括：步骤(1)，将低温保存的金龟子绿僵菌菌种转接至PDA培养基斜面上，25‑35℃条件下培养2‑4天，实现菌种的充分活化，活化培养后的菌种接种摇瓶进行种子培养；步骤(2)，选定摇瓶培养基，其组成为葡萄糖1‑5重量份、MgSO4 0.1‑0.6重量份、KCl 0.1‑0.3重量份、ZnSO4 0.2‑0.3重量份、K2HPO4 0.1‑0.9重量份、琼脂1‑3重量份、K2HPO4 0.1‑0.9重量份和蒸馏水20‑50重量份；摇瓶接种时采用培养基直接接种摇瓶，摇瓶培养的参数如下：摇床转速为150rpm，培养温度为29‑30℃，时间为48‑70h；即得菌种；步骤(3)，准备初步发酵液体培养基，所述初步发酵液体培养基包括：葡萄糖10‑15重量份，酵母1‑6重量份，MgSO4 1‑5重量份，KCl 0.2‑2重量份，ZnSO4 0.2‑3重量份和蒸馏水200‑2000重量份；将种子罐灭菌进行初步发酵，接种条件具体为：培养基121℃灭菌30min，此时pH范围在6.0‑6.5；发酵液按罐装量的4％体积比接种，接种温度为30℃以下，发酵时间为18‑24小时；初步发酵所得种子液呈粘稠状，孢子含量达到6×107/ml以上；步骤(4)，准备深度发酵液体培养基，所述深度发酵液体培养基包括葡萄糖20‑50重量份，酵母10‑15重量份，MgSO4 6‑10重量份，KCl 5‑9重量份，ZnSO4 3‑7重量份，农作物秸秆50‑200重量份和蒸馏水500‑3000重量份；深度发酵的生产罐灭菌、接种条件具体为：培养基经121℃灭菌30min，发酵液按罐装量的4％体积比接种，接种温度为30℃以下；发酵温度28±1℃，发酵周期为42‑50小时；深度发酵所得菌液中液生孢子含量在5×108/ml以上；步骤(5)，将步骤(4)所得到的菌液在发酵罐中搅拌，分散菌丝以及孢子，加入菌液重量10‑28％的活性炭以及菌液重量0.01‑2％的吐温60，搅拌，制备成菌悬液备用；步骤(6)，将步骤(5)得到的菌悬液与辣根素、百菌清、柠檬酸以及印楝素按照1‑2∶0.1‑0.8∶0.2‑0.5∶0.01‑0.2∶0.5‑1.2混合均匀，干燥即得所述的长效生物杀线虫组合物。