[发明专利]一种甲基营养菌发酵液中吡咯喹啉醌的分离纯化方法及其应用

摘要

本发明公开了一种甲基营养菌发酵液中吡咯喹啉醌的分离纯化方法及其应用。本发明的方法包括如下步骤：(1)将发酵液先经大孔树脂富集，再依次经过缓冲液和水进行洗脱，收集洗脱液，得到富含吡咯喹啉醌的富集液；(2)将所述富含吡咯喹啉醌的富集液经亲水性硅胶填料纯化，得到吡咯喹啉醌母液；(3)使所述吡咯喹啉醌母液中的吡咯喹啉醌结晶析出，得到吡咯喹啉醌粗晶体；(4)采用碱溶酸沉法将所述吡咯喹啉醌粗晶体进行重结晶，得到吡咯喹啉醌。通过实验证明：本发明的方法具有工艺操作简单、衔接度高，产品回收率和纯度高的特点，可用于大规模工业化生产制备吡咯喹啉醌。

主权项

1.一种从发酵液中分离纯化吡咯喹啉醌的方法，包括如下步骤：（1）将发酵液先经大孔树脂富集，再依次经过缓冲液和水进行洗脱，收集洗脱液，得到富含吡咯喹啉醌的富集液；所述洗脱的具体步骤如下：先用pH 6.5的0.1 M磷酸盐缓冲液以2 BV/h的流速洗脱1 BV，再用纯水以2 BV/h的流速继续洗脱，洗脱液颜色先由无色变为红色至暗红色，最后变为黄色，收集红色至暗红色的洗脱液，即为富含吡咯喹啉醌的富集液；（2）将所述富含吡咯喹啉醌的富集液经亲水性硅胶填料纯化，得到吡咯喹啉醌母液；（3）使所述吡咯喹啉醌母液中的吡咯喹啉醌结晶析出，得到吡咯喹啉醌粗晶体；（4）采用碱溶酸沉法将所述吡咯喹啉醌粗晶体进行重结晶，得到吡咯喹啉醌，具体为：用水溶解所述吡咯喹啉醌粗晶体，得到浓度为10‑15 g/L的粗晶体溶液；用氢氧化钠水溶液调节所述粗晶体溶液的pH至10.0‑10.5，再用硫酸溶液调节pH至2.0‑3.5，静置，离心，收集沉淀即得到吡咯喹啉醌；所述步骤（1）前还包括如下步骤：将发酵液离心，收集上清液；将所述上清液过滤，收集滤液。