[发明专利]多重交联壳聚糖或其衍生物凝胶的体外梯度降解方法

摘要

本发明涉一种多重交联壳聚糖凝胶的体外梯度降解方法。采用自由基对多重交联壳聚糖或其衍生物凝胶进行降解，并采用凯氏定氮仪对降解产物进行定量;或采用溶菌酶对多重交联壳聚糖或其衍生物凝胶进行降解，并采用GB/T 5009.7‑2016《食品安全国家标准食品中还原糖的测定》中第三法铁氰化钾还原糖测定法对降解产物进行定量。该方法模拟体内酶环境或自由基环境，通过酶或自由基对多重交联壳聚糖凝胶进行定量降解，通过确定降解产物中还原糖的含量或降解产物中的氮含量的测定，确定壳聚糖凝胶的降解程度，从而获得多重交联壳聚糖凝胶的降解曲线，确定壳聚糖凝胶的降解周期。

主权项

1.一种多重交联壳体或其衍生物凝胶的体外梯度降解方法，其特征在于包括以下步骤:1）配置浓度为0.001~0.1 mol/L的抗坏血酸溶液，并用1~6 mol/L盐酸调节pH至3~3.5；2）取交联壳聚糖或其衍生物凝胶1~10 mL,质量浓度范围为10~500mg/mL,置于10~50 mL离心管，加入步骤1）中的抗坏血酸溶液1~10 mL，并冷却至0~5℃；2）保持0~5℃的环境，加入双氧水溶液1~10 mL，其中双氧水浓度与加入体积与抗坏血酸的浓度与体积相等，双氧水的浓度为0.001~0.1 mol/L；3）将体系置于恒温水浴振荡器中，震荡温度设定37℃，每隔10~20 min进行取样，每次取出降解液100~500 μL，同时补充步骤1）中抗坏血酸溶液100~500 μL，总降解时间为120~1440min；4）将取出后的降解液用浓度为1mol/L氢氧化钠中和至pH=7.0后，密封在截留分子量10~14 KDa的透析袋中，采用5 mL纯水进行定量透析，透析时间为2~4 h；5）取透析液4.0 mL，采用凯氏定氮仪检测透析液中的氮含量；6）凝胶的降解率将按照下面三个公式进行计算：  （公式1）             （公式2）  （公式3）c_N：采用凯氏定氮仪检测出的待检样品总氮含量，mg/g；M: 聚壳聚糖或其衍生物单糖单元分子量， g/mol;m：待检样品质量，g；F：待检样品中水分含量，%；V₁：样品管消耗标准硫酸溶液体积，L；V₀：空白管消耗标准硫酸溶液体积，L；c：标准硫酸溶液的浓度,mol/L；c₁：聚壳聚糖或其衍生物含量，%；14：氮原子质量，g/mol；w：产品中羧甲基葡糖胺聚糖的降解率，%；X为样品溶液的总体积与凯氏定氮仪所需测试液体积的比值,L/L。