[发明专利]一种微量抽测植物悬浮培养细胞液浓度的方法

摘要

本发明公开了一种微量抽测植物悬浮培养细胞液浓度的方法，包括：1）微量抽测获得细胞液中染色细胞的面积数据，2）染色细胞面积与细胞液浓度的标准曲线，3）建立抗性赤松13‑1悬浮继代培养的生长模型。本发明的微量抽测植物悬浮培养细胞液浓度的方法，采用微量抽测的方式测量细胞液浓度，每次仅需吸取0.1mL的待测细胞液，控制无菌的条件下该细胞液仍可继续培养增殖；本方法使用Image‑Pro Plus软件进行计数，可批量处理数据节约时间和减少人工判断误差。

主权项

1.一种微量抽测植物悬浮培养细胞液浓度的方法，其特征在于，步骤如下：1）配制悬浮继代细胞的系列标准浓度细胞液；染色，拍摄获得图片；2）使用Image‑Pro Plus软件处理拍摄的图片，获得细胞液中染色细胞的面积数据；3）将获得的染色细胞面积数据与其标准浓度一一对应，绘制散点图、标准曲线并得到回归方程，并对标准曲线进行相关性评价；4）建立植物悬浮培养细胞继代培养的生长模型；5）应用生长模型计算获得悬浮培养细胞液浓度；步骤1）中，配制悬浮继代细胞的系列标准浓度细胞液；染色，拍摄获得图片；具体过程如下：（1）收集抗性赤松胚性细胞团13‑1悬浮继代的细胞，测量细胞鲜重并配制3g/30mL原始浓度细胞液，摇晃均匀，取0mL、2mL、4mL、6mL、8mL原始浓度液体，分别加无菌水至10mL，制成0g/mL、0.02g/mL、0.04g/mL、0.06g/mL、0.08g/mL、0.1g/mL的标准浓度细胞液；（2）在超净工作台中对各浓度的细胞液各取0.1 mL加到5 mL的离心管中；使用0.2 mL 1%醋酸洋红染色1‑2个小时，加水洗去染色液，将洗净后的细胞液倒入35 mm直径的培养皿中；在白色底板上放置一透明洁净的60mm玻璃平皿盖，将35mm培养皿中的细胞液置于平皿盖上，每个标准浓度抽测6个样，使用相机对每个样拍摄清晰的细胞染色照片；步骤2）中，使用Image‑Pro Plus软件处理拍摄的图片，获得细胞液中染色细胞的面积数据；具体过程如下：（1）拍摄的照片中13‑1悬浮细胞染成红色，采用Image Pro Plus 6.0软件打开拍摄的染色细胞照片；单击Measure>count/size>点选手动选色Manul选项>点击Select Colors>设置HSI取色模式改变S值范围为88‑255>单击file保存命名取色设置数据；单击Measure>打开Data Collector>设置输出的选项为图片名、目标数目、目标总面积；设置好选色和输出数据后单击Count便可在Data Collector中返回相应的数据；（2）Image‑Pro Plus制作相应的宏程序，批量处理拍摄获得的图片，获得细胞液中染色细胞的面积数据；所述的植物悬浮培养细胞为抗性赤松胚性细胞团13‑1。