[发明专利]应用Asta-E-H脂肪酶定量检测雨生红球藻萃取物中虾青素的方法

摘要

本发明应用Asta‑E‑H脂肪酶定量检测雨生红球藻萃取物中虾青素的方法，涉及一种天然植物中有效成分含量测定的方法。其目的是为了提供应用Asta‑E‑H脂肪酶定量检测雨生红球藻萃取物中虾青素的方法，该方法采用脂肪酶催化水解经吐温80乳化后的雨生红球藻萃取物中的虾青素酯，然后采用高效液相色谱法对其中的虾青素进行测定。本发明的方法包括以下步骤：虾青素标准液的配制；磷酸盐缓冲液的配制；雨生红球藻萃取物样品液的制备；高效液相色谱法测定虾青素含量。本发明的方法酶解过程中不产生虾红素副产物及顺式游离态虾青素，检出限低，加样回收率高，线性关系良好，且成本低廉，易于推广应用。

主权项

一种应用Asta‑E‑H脂肪酶定量检测雨生红球藻萃取物中虾青素的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：(1)虾青素标准液的配制：称取0.95～1.05mg虾青素标准品，记为MB，用丙酮定容至10mL，取1mL用丙酮定容至5mL；虾青素标准液的浓度为CAst：(2)磷酸盐缓冲液的配制：11.411g磷酸氢二钾溶解于500mL水中，得到0.05mol/L磷酸氢二钾溶液；6.8045g磷酸二氢钾溶解于500mL水中得到0.05mol/L磷酸二氢钾溶液；将61.5mL的0.05mol/L磷酸氢二钾溶液与38.5mL的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液混合，得到0.1mol/L的磷酸盐缓冲液，pH值为7；(3)雨生红球藻萃取物样品液的制备：a、雨生红球藻供试液的配制：研钵中加入45～55mg吐温80，再加入45～55mg雨生红球藻萃取物，记为MS，研磨乳化混匀后，加入3～5mL磷酸盐缓冲液溶解，之后用磷酸盐缓冲液定容至10mL，制得雨生红球藻供试液；b、雨生红球藻萃取物的酶促水解：称取1g脂肪酶Asta‑E‑H粉剂，加入2～3mL磷酸盐缓冲液混匀，然后加入0.1mL步骤a中制得的雨生红球藻供试液，之后用磷酸盐缓冲液定容至5mL，31℃水浴5h，得到反应液；c、反应液的前处理：取0.4mL步骤b制得的反应液，加入0.8mL蒸馏水混匀，加入1mL丙酮混匀，再加入1mL丙酮混匀，加入0.8mL正己烷混匀，静置30s后3000r/min离心5min；离心后的混合溶液分层，用移液枪移出上相液体，再重复用0.8mL正己烷萃取下相，静置离心，移出上相的操作，直至上相液体无色；合并上相萃取液，用氮气浓缩，最终吹干在1.5mL的离心管中；d、雨生红球藻萃取物样品液：向步骤c的离心管中加入0.1mL丙酮，超声30s后10000r/min离心5min，得到用于高效液相色谱法分析的雨生红球藻萃取物样品液S；(4)采用高效液相色谱法测定步骤(1)配制的虾青素标准液峰面积PB及步骤(3)制得的雨生红球藻萃取物样品液的峰面积PS，根据所得峰面积和虾青素标准液的浓度计算雨生红球藻萃取物中虾青素的含量。