[发明专利]用于实体瘤靶向用药指导的多基因富集和检测方法

摘要

本发明提供了一种用于实体瘤靶向用药指导的多基因富集和检测方法。该方法利用多探针靶向捕获技术结合二代测序技术，用于富集和检测实体瘤中76个基因的变异情况，如突变，缺失，插入，融合，拷贝数变化，从而准确快速达到检测用于实体瘤用药指导的基因变异的目的。

主权项

一种富集实体瘤76个目标基因靶片段的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)DNA抽提：样本DNA抽提；其中，所述步骤1)中的样本为来自人的组织、细胞或者体液。2)文库构建：将DNA样本进行片段化；片段化DNA末端修复和加碱基A，并与带有T碱基接头(Adaptor/Adapter)连接，使用接头相应的扩增引物对纯化后的连接产物进行PCR扩增；其中，所述步骤2)中的进行片段化是使用超声破碎仪进行片段化。3)文库捕获：将步骤2)获取的文库与DNA捕获探针进行杂交，去除未结合的DNA，获得的DNA即为富集的目标基因靶片段。其中，所述步骤3)中的DNA捕获探针，是指能够与目标基因进行杂交的带有选择性标记的多个探针的混合物。所述探针通过以下方式获得：3‑1)将目标基因的DNA序列及其两侧的侧翼序列作为目标区域，设计多个能够与目标区域杂交的DNA探针；3‑2)DNA探针的长度限定为120个碱基，探针以叠瓦式设计，完整覆盖全部待测基因片段和两端50bp范围的序列，探针间重叠部分为12个碱基。