[发明专利]一种原位测定饮用水生物活性炭TTC‑脱氢酶活性的方法

摘要

一种原位测定饮用水生物活性炭TTC‑脱氢酶活性的方法，涉及一种测定饮用水生物活性炭TTC‑脱氢酶活性的方法。本发明是为了解决目前间接测定饮用水生物活性炭TTC‑脱氢酶活性的方法中微生物活性在从活性炭滤料转移至溶液的过程中受损，导致在后续的测定中难以检测到其生物活性的技术问题。本发明一、绘制TF标准曲线；二、样品处理；三、样品培养；四、样品培养；五、终止酶反应；六、比色分析；七、计算TTC‑脱氢酶活性。发明优点本发明的更容易检测到活性炭的TTC‑脱氢酶活性，可以检测生物量为4.5×104CFU/g活性炭；本发明方法省略了对活性炭样品预处理的步骤，操作工序更为简便。

主权项

一种原位测定饮用水生物活性炭TTC‑脱氢酶活性的方法，其特征在于原位测定饮用水生物活性炭TTC‑脱氢酶活性的方法是按以下步骤进行的：一、以吸光度值做横坐标，以TF浓度做纵坐标，绘出TF标准曲线；二、样品处理：从水中取出待测的活性炭滤料，用蒸馏水反复洗涤3次～4次，然后将洗涤后的活性炭滤料按质量平均分成2份，分别放入两支具塞比色管中；三、向步骤二中的两支具塞比色管中分别加入Tris‑HCL缓冲溶液、质量分数为0.36％的Na2SO3溶液、浓度为0.1mol/L的葡萄糖溶液和质量浓度为0.4％的TTC溶液至活性炭滤料完全浸没，然后向其中一支具塞比色管中加入甲醛溶液终止酶反应作为空白组，另一支具塞比色管作为试验组；所述的质量浓度为0.4％的TTC溶液和质量分数为0.36％的Na2SO3溶液的体积比为1:1；所述的质量浓度为0.4％的TTC溶液和浓度为0.1mol/L的葡萄糖溶液的体积比为1:1；所述的质量浓度为0.4％的TTC溶液和Tris‑HCL缓冲溶液的体积比为1:3；四、样品培养：将试验组和空白组的具塞比色管均放入温度为36℃～38℃的恒温水浴振荡器中培养20h～22h；五、终止酶反应：向试验组的具塞比色管中加入甲醛溶液终止酶反应，混合均匀，然后和空白组一起在转速为4000rpm～4500rpm的条件下离心5min～8min，弃去上清液；六、比色分析：向步骤五的试验组和空白组的具塞比色管中分别加入质量分数为80％的丙酮溶液，分别将两支具塞比色管底部的沉积物搅拌混合均匀，然后放入温度为36℃～38℃的恒温水浴振荡器萃取10min，然后分别将两支具塞比色管在转速为4000rpm～4500rpm的条件下离心5min～8min，将试验组的下层沉积物在温度为75℃～80℃的条件下烘干6h～6.5h，称量干重m，分别对离心后的试验组和空白组的上层清液在紫外可见分光光度计上于485nm处测量吸光度A1和A2，A1为试验组的吸光度，A2为空白组的吸光度；所述的质量分数为80％的丙酮溶液的体积是步骤二中Tris‑HCL缓冲溶液、质量分数为0.36％的Na2SO3溶液、浓度为0.1mol/L的葡萄糖溶液和体积浓度为0.4％的TTC溶液体积之和的1.5倍；七、计算TTC‑脱氢酶活性：将步骤六得到的A1和A2做差，即A1‑A2得到的差值代入步骤一的TF标准曲线中得到TF浓度Y，根据如下公式计算TTC‑脱氢酶活性C，C＝Y×H/m×d，式中的H为步骤六中加入的质量分数为80％的丙酮溶液的体积，单位是mL，C的单位是μg/(gdw·h)，Y的单位是μg/mL，m为步骤六中试验组的下层沉积物的干重，单位是g，d是步骤四中的培养时间，单位是h。