[发明专利]同时检测6种猪病毒的系统及其专用LAMP引物有效

专利信息
申请号: 201710467125.9 申请日: 2017-06-19
公开(公告)号: CN107034316B 公开(公告)日: 2019-12-24
发明(设计)人: 许俊泉;胥慧;袁向芬;范晓攀;吴绍强;徐洪涛;孙晶华;邓企飞;王彩霞;欧阳兆槐 申请(专利权)人: 北京博奥晶典生物技术有限公司;中国检验检疫科学研究院
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
代理公司: 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 代理人: 关畅;何叶喧
地址: 101111 北京市大兴区*** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明公开了一种用于同时检测6种猪病毒的系统及其专用LAMP引物。该系统包括检测6种猪病毒的LAMP成套引物和/或LAMP所需的试剂和/或仪器和/或扩增产物数据处理器;所述扩增产物数据处理器用于区分检测6种猪病毒的LAMP成套引物对待测样本进行环介导等温扩增得到的待测样本扩增产物中是否含有特异性扩增产物。本发明提供的6种猪病毒的检测系统及其专用LAMP引物可满足对猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型、猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒的同时快速检测,检测系统操作简单、结果便于观察,对于猪养殖场的疫病监测将提供强大的技术支持。
搜索关键词: 种猪 扩增产物 病毒 数据处理器 成套引物 检测系统 检测 猪繁殖与呼吸综合征病毒 环介导等温扩增 特异性扩增产物 猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒Ⅱ型 猪口蹄疫病毒 猪细小病毒 待测样本 技术支持 快速检测 疫病监测 猪瘟病毒 养殖场 样本 观察
【主权项】:
1.检测6种猪病毒的LAMP成套引物,由如下六个引物组组成:用于检测猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型的引物组、用于检测猪瘟病毒的引物组、用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型的引物组、用于检测猪圆环病毒Ⅱ型的引物组、用于检测猪细小病毒的引物组、用于检测猪伪狂犬病病毒的引物组;/n所述用于检测猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型的引物组为猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型正义6引物组、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型反义6引物组、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型正义4引物组或猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型反义4引物组;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型正义6引物组由猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物F3-Z、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物B3-Z、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物FIP-Z、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物BIP-Z、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物LF-Z和猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物LB-Z这6条引物组成;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物F3-Z为如下a1)或a2)的单链DNA分子:/na1)序列表的序列1第1-18位核苷酸所示;/na2)序列表的序列7所示;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物B3-Z为如下a5)或a6)的单链DNA分子:/na5)与序列表的序列1第180-198位核苷酸反向互补;/na6)序列表的序列8所示;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物FIP-Z为如下a9)或a10)的单链DNA分子:/na9)A1-L1-B1;A1与序列表的序列1第87-104位核苷酸反向互补,B1如序列表的序列1第28-46位核苷酸所示,L1为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/na10)序列表的序列9所示;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物BIP-Z为如下a13)或a14)的单链DNA分子:/na13)A2-L2-B2;A2如序列表的序列1第107-125位核苷酸所示,B2与序列表的序列1第149-166位核苷酸反向互补,L2为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/na14)序列表的序列10所示;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物LF-Z为如下a17)或a18)的单链DNA分子:/na17)与序列表的序列1第47-64位核苷酸反向互补;/na18)序列表的序列11所示;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物LB-Z为如下a21)或a22)的单链DNA分子:/na21)序列表的序列1第127-148位核苷酸所示;/na22)序列表的序列12所示;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型反义6引物组由猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物F3-F、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物B3-F、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物FIP-F、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物BIP-F、猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物LF-F和猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物LB-F这6条引物组成;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型正义4引物组由所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物F3-Z、所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物B3-Z、所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物FIP-Z和所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物BIP-Z这4条引物组成;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型反义4引物组由所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物F3-F、所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物B3-F、所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物FIP-F和所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物BIP-F这4条引物组成;/n所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物F3-F是所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物F3-Z的反义DNA;所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物B3-F是所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物B3-Z的反义DNA;所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物FIP-F是所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物FIP-Z的反义DNA;所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物BIP-F是所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物BIP-Z的反义DNA;所述猪口蹄疫病毒O/A/AsiaI型引物LF-F是所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物LF-Z的反义DNA;所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物LB-F是所述猪口蹄疫病毒O/A/Asia I型引物LB-Z的反义DNA;/n所述用于检测猪瘟病毒的引物组为猪瘟病毒正义6引物组、猪瘟病毒反义6引物组、猪瘟病毒正义4引物组或猪瘟病毒反义4引物组;/n所述猪瘟病毒正义6引物组由猪瘟病毒引物F3-Z、猪瘟病毒引物B3-Z、猪瘟病毒引物FIP-Z、猪瘟病毒引物BIP-Z、猪瘟病毒引物LF-Z和猪瘟病毒引物LB-Z这6条引物组成;/n所述猪瘟病毒引物F3-Z为如下b1)或b2)的单链DNA分子:/nb1)序列表的序列2第2-19位核苷酸所示;/nb2)序列表的序列13所示;/n所述猪瘟病毒引物B3-Z为如下b5)或b6)的单链DNA分子:/nb5)与序列表的序列2第232-249位核苷酸反向互补;/nb6)序列表的序列14所示;/n所述猪瘟病毒引物FIP-Z为如下b9)或b10)的单链DNA分子:/nb9)A3-L3-B3;A3与序列表的序列2第61-81位核苷酸反向互补,B3如序列表的序列2第21-38位核苷酸所示,L3为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/nb10)序列表的序列15所示;/n所述猪瘟病毒引物BIP-Z为如下b13)或b14)的单链DNA分子:/nb13)A4-L4-B4;A4如序列表的序列2第84-102位核苷酸所示,B4与序列表的序列2第148-166位核苷酸反向互补,L4为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/nb14)序列表的序列16所示;/n所述猪瘟病毒引物LF-Z为如下b17)或b18)的单链DNA分子:/nb17)与序列表的序列2第39-60位核苷酸反向互补;/nb18)序列表的序列17所示;/n所述猪瘟病毒引物LB-Z为如下b21)或b22)的单链DNA分子:/nb21)序列表的序列2第119-139位核苷酸所示;/nb22)序列表的序列18所示;/n所述猪瘟病毒反义6引物组由猪瘟病毒引物F3-F、猪瘟病毒引物B3-F、猪瘟病毒引物FIP-F、猪瘟病毒引物BIP-F、猪瘟病毒引物LF-F和猪瘟病毒引物LB-F这6条引物组成;/n所述猪瘟病毒正义4引物组由所述猪瘟病毒引物F3-Z、所述猪瘟病毒引物B3-Z、所述猪瘟病毒引物FIP-Z和所述猪瘟病毒引物BIP-Z这4条引物组成;/n所述猪瘟病毒反义4引物组由所述猪瘟病毒引物F3-F、所述猪瘟病毒引物B3-F、所述猪瘟病毒引物FIP-F和所述猪瘟病毒引物BIP-F这4条引物组成;/n所述猪瘟病毒引物F3-F是所述猪瘟病毒引物F3-Z的反义DNA;所述猪瘟病毒引物B3-F是所述猪瘟病毒引物B3-Z的反义DNA;所述猪瘟病毒引物FIP-F是所述猪瘟病毒引物FIP-Z的反义DNA;所述猪瘟病毒引物BIP-F是所述猪瘟病毒引物BIP-Z的反义DNA;所述猪瘟病毒引物LF-F是所述猪瘟病毒引物LF-Z的反义DNA;所述猪瘟病毒引物LB-F是所述猪瘟病毒引物LB-Z的反义DNA;/n所述用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型的引物组为猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型正义6引物组、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型反义6引物组、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型正义4引物组或猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型反义4引物组;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型正义6引物组由猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物F3-Z、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物B3-Z、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物FIP-Z、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物BIP-Z、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LF-Z和猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LB-Z这6条引物组成;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物F3-Z为如下c1)或c2)的单链DNA分子:/nc1)序列表的序列3第1-20位核苷酸所示;/nc2)序列表的序列19所示;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物B3-Z为如下c5)或c6)的单链DNA分子:/nc5)与序列表的序列3第250-267位核苷酸反向互补;/nc6)序列表的序列20所示;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物FIP-Z为如下c9)或c10)的单链DNA分子:/nc9)A5-L5-B5;A5与序列表的序列3第124-143位核苷酸反向互补,B5如序列表的序列3第78-95位核苷酸所示,L5为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/nc10)序列表的序列21所示;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物BIP-Z为如下c13)或c14)的单链DNA分子:/nc13)A6-L6-B6;A6如序列表的序列3第180-201位核苷酸所示,B6与序列表的序列3第232-249位核苷酸反向互补,L6为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/nc14)序列表的序列22所示;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LF-Z为如下c17)或c18)的单链DNA分子:/nc17)与序列表的序列3第99-117位核苷酸反向互补;/nc18)序列表的序列23所示;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LB-Z为如下c21)或c22)的单链DNA分子:/nc21)序列表的序列3第206-225位核苷酸所示;/nc22)序列表的序列24所示;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型反义6引物组由猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物F3-F、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物B3-F、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物FIP-F、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物BIP-F、猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LF-F和猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LB-F这6条引物组成;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型正义4引物组由所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物F3-Z、所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物B3-Z、所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物FIP-Z和所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物BIP-Z这4条引物组成;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型反义4引物组由所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物F3-F、所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物B3-F、所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物FIP-F和所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物BIP-F这4条引物组成;/n所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物F3-F是所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物F3-Z的反义DNA;所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物B3-F是所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物B3-Z的反义DNA;所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物FIP-F是所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物FIP-Z的反义DNA;所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物BIP-F是所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物BIP-Z的反义DNA;所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LF-F是所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LF-Z的反义DNA;所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LB-F是所述猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型引物LB-Z的反义DNA;/n所述用于检测猪圆环病毒Ⅱ型的引物组为猪圆环病毒Ⅱ型正义6引物组、猪圆环病毒Ⅱ型反义6引物组、猪圆环病毒Ⅱ型正义4引物组或猪圆环病毒Ⅱ型反义4引物组;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型正义6引物组由猪圆环病毒Ⅱ型引物F3-Z、猪圆环病毒Ⅱ型引物B3-Z、猪圆环病毒Ⅱ型引物FIP-Z、猪圆环病毒Ⅱ型引物BIP-Z、猪圆环病毒Ⅱ型引物LF-Z和猪圆环病毒Ⅱ型引物LB-Z这6条引物组成;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型引物F3-Z为如下d1)或d2)的单链DNA分子:/nd1)序列表的序列4第2-21位核苷酸所示;/nd2)序列表的序列25所示;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型引物B3-Z为如下d5)或d6)的单链DNA分子:/nd5)与序列表的序列4第178-196位核苷酸反向互补;/nd6)序列表的序列26所示;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型引物FIP-Z为如下d9)或d10)的单链DNA分子:/nd9)A7-L7-B7;A7与序列表的序列4第63-84位核苷酸反向互补,B7如序列表的序列4第23-42位核苷酸所示,L7为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/nd10)序列表的序列27所示;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型引物BIP-Z为如下d13)或d14)的单链DNA分子:/nd13)A8-L8-B8;A8如序列表的序列4第101-122位核苷酸所示,B8与序列表的序列4第157-176位核苷酸反向互补,L8为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/nd14)序列表的序列28所示;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型引物LF-Z为如下d17)或d18)的单链DNA分子:/nd17)与序列表的序列4第43-62位核苷酸反向互补;/nd18)序列表的序列29所示;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型引物LB-Z为如下d21)或d22)的单链DNA分子:/nd21)序列表的序列4第123-144位核苷酸所示;/nd22)序列表的序列30所示;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型反义6引物组由猪圆环病毒Ⅱ型引物F3-F、猪圆环病毒Ⅱ型引物B3-F、猪圆环病毒Ⅱ型引物FIP-F、猪圆环病毒Ⅱ型引物BIP-F、猪圆环病毒Ⅱ型引物LF-F和猪圆环病毒Ⅱ型引物LB-F这6条引物组成;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型正义4引物组由所述猪圆环病毒Ⅱ型引物F3-Z、所述猪圆环病毒Ⅱ型引物B3-Z、所述猪圆环病毒Ⅱ型引物FIP-Z和所述猪圆环病毒Ⅱ型引物BIP-Z这4条引物组成;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型反义4引物组由所述猪圆环病毒Ⅱ型引物F3-F、所述猪圆环病毒Ⅱ型引物B3-F、所述猪圆环病毒Ⅱ型引物FIP-F和所述猪圆环病毒Ⅱ型引物BIP-F这4条引物组成;/n所述猪圆环病毒Ⅱ型引物F3-F是所述猪圆环病毒Ⅱ型引物F3-Z的反义DNA;所述猪圆环病毒Ⅱ型引物B3-F是所述猪圆环病毒Ⅱ型引物B3-Z的反义DNA;所述猪圆环病毒Ⅱ型引物FIP-F是所述猪圆环病毒Ⅱ型引物FIP-Z的反义DNA;所述猪圆环病毒Ⅱ型引物BIP-F是所述猪圆环病毒Ⅱ型引物BIP-Z的反义DNA;所述猪圆环病毒Ⅱ型引物LF-F是所述猪圆环病毒Ⅱ型引物LF-Z的反义DNA;所述猪圆环病毒Ⅱ型引物LB-F是所述猪圆环病毒Ⅱ型引物LB-Z的反义DNA;/n所述用于检测猪细小病毒的引物组为猪细小病毒正义6引物组、猪细小病毒反义6引物组、猪细小病毒正义4引物组或猪细小病毒反义4引物组;/n所述猪细小病毒正义6引物组由猪细小病毒引物F3-Z、猪细小病毒引物B3-Z、猪细小病毒引物FIP-Z、猪细小病毒引物BIP-Z、猪细小病毒引物LF-Z和猪细小病毒引物LB-Z这6条引物组成;/n所述猪细小病毒引物F3-Z为如下e1)或e2)的单链DNA分子:/ne1)序列表的序列5第1-21位核苷酸所示;/ne2)序列表的序列31所示;/n所述猪细小病毒引物B3-Z为如下e5)或e6)的单链DNA分子:/ne5)与序列表的序列5第187-206位核苷酸反向互补;/ne6)序列表的序列32所示;/n所述猪细小病毒引物FIP-Z为如下e9)或e10)的单链DNA分子:/ne9)A9-L9-B9;A9与序列表的序列5第68-87位核苷酸反向互补,B9如序列表的序列5第22-41位核苷酸所示,L9为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/ne10)序列表的序列33所示;/n所述猪细小病毒引物BIP-Z为如下e13)或e14)的单链DNA分子:/ne13)A10-L10-B10;A10如序列表的序列5第123-143位核苷酸所示,B10与序列表的序列5第168-189位核苷酸反向互补,L10为由0-10个核苷酸组成的间隔区段;/ne14)序列表的序列34所示;/n所述猪细小病毒引物LF-Z为如下e17)或e18)的单链DNA分子:/ne17)与序列表的序列5第42-65位核苷酸反向互补;/ne18)序列表的序列35所示;/n所述猪细小病毒引物LB-Z为如下e21)或e22)的单链DNA分子:/ne21)序列表的序列5第147-162位核苷酸所示;/ne22)序列表的序列36所示;/n所述猪细小病毒反义6引物组由猪细小病毒引物F3-F、猪细小病毒引物B3-F、猪细小病毒引物FIP-F、猪细小病毒引物BIP-F、猪细小病毒引物LF-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