[发明专利]一种过表达MGST1基因人肺腺癌细胞的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201710491161.9 | 申请日： | 2017-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN107937436A | 公开（公告）日： | 2018-04-20 |
| 发明（设计）人： | 宋鑫;曾宝真;葛春蕾;孟旭东 | 申请（专利权）人： | 信雅生物科技（苏州）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 上海宣宜专利代理事务所(普通合伙)31288 | 代理人： | 刘君 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种构建稳定过表达MGST1基因细胞及初步研究其生物学特性的方法，其包括如下步骤(1)通过PCR合成人的MGST1目的基因片段。(2)将MGST1目的基因片段与真核质粒pcDNA3连接，形成真核重组质粒。将上述真核重组质粒转化到感受态细菌细胞中进行培养，然后挑选单克隆进行PCR扩增凝胶电泳筛选出阳性克隆。(3)抽提上一步中筛选出来的阳性克隆，利用限制性内切酶双酶切图谱分析所建的真核重组质粒，并进行DNA序列分析。(4)将上一步中获得的序列正确的重组质粒pcDNA3‑MGST1转染SPC‑A‑1人肺腺癌细胞，并用G418筛选稳定过表达MGST1的SPC‑A‑1细胞，观察稳定过表达MGST1的细胞生物学特性。结果表明稳定过表达MGST1可促进细胞的增殖、抑制细胞的凋亡和增加细胞克隆形成能力。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 mgst1 基因 腺癌 细胞 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种构建稳定过表达MGST1基因细胞的方法，其包括如下步骤：(1)通过PCR(聚合酶链式反应)合成人的MGST1目的基因片段；(2)将上述获得的MGST1目的基因片段与真核质粒pcDNA3连接，形成真核重组质粒，其中该插入MGST1目的基因的酶切位点分别为Hind III和Kpn I。将上述真核重组质粒转化到感受态细菌中进行培养，然后挑选出单克隆进行PCR凝胶电泳进行阳性克隆的筛选；(3)抽提上一步中筛选出来的阳性克隆，利用限制性内切酶双酶切图谱分析所建的真核重组质粒，并进行DNA序列分析。(4)将上一步中获得的序列正确的重组质粒pcDNA3‑MGST1转染SPC‑A‑1人肺腺癌细胞，并用G418筛选稳定过表达MGST1的SPC‑A‑1细胞，观察稳定过表达MGST1的细胞生物学特性。
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