[发明专利]一种基于流式细胞术的构建基因敲除细胞系的方法在审
| 申请号： | 201710494777.1 | 申请日： | 2017-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN107236763A | 公开（公告）日： | 2017-10-10 |
| 发明（设计）人： | 薛璐;欧阳聪;周婉;刘庆华;沈金花;彭勇波;赵平;马立群;于孟飞;陈微微 | 申请（专利权）人： | 中南民族大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/12 |
| 代理公司： | 武汉华旭知识产权事务所42214 | 代理人： | 刘天钰 |
| 地址： | 430074 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于流式细胞术的构建基因敲除细胞系的方法，包括以下步骤(1)、细胞系的转染构建带有GFP的序列的PX458‑sgRNA重组质粒，然后将PX458‑sgRNA重组质粒用lipo3000转染到细胞中，使细胞带上绿色荧光；(2)、流式细胞术分选阳性细胞然后利用流式细胞仪将带绿色荧光的细胞分选为单细胞；(3)、单细胞培养将分选后的带有绿色荧光的单细胞用细胞培养板进行培养；(4)、测序检测将培养完毕后的细胞提取基因组并测序，筛选出基因敲除后的细胞系。本发明中解决了现有技术中构建敲除细胞系过程中的转染效率及慢病毒包装两个瓶颈，更为简便、省时。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 细胞 构建 基因 细胞系 方法 | ||
【主权项】：
一种基于流式细胞术的构建基因敲除细胞系的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)、细胞系的转染：构建带有GFP的序列的PX458‑sgRNA重组质粒，然后将PX458‑sgRNA重组质粒用lipo2000转染到细胞中，使细胞带上绿色荧光；(2)、流式细胞术分选阳性细胞：然后利用流式细胞仪将带绿色荧光的细胞分选为单细胞；(3)、单细胞培养：将分选后的带有绿色荧光的单细胞用细胞培养板进行培养；(4)、测序检测：将培养完毕后的细胞提取基因组并测序，筛选出基因敲除后的细胞系。
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