[发明专利]Aβ42在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化方法

摘要

本发明属于生物技术和基因工程技术领域，具体为Aβ42在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化方法。本发明构建的Aβ42表达体系提供了原核生物可溶性融合表达人淀粉样蛋白Aβ42的表达载体的构建方法，并将表达载体导入至大肠杆菌表达宿主中，经诱导表达、蛋白酶切、两步纯化及鉴定后获得具有高纯度生物活性的目标Aβ42。本方法所采用的大肠表达系统及融合蛋白，具有表达效率高、表达量大、成本低、易操作等特点，所表达的Aβ42多肽不含任何残基、纯度高、产率高等优点。

主权项

一种Aβ42在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化的方法，其特征在于，包括重组表达载体构建、转化与筛选、诱导表达及纯化，步骤如下：(1)将3个(NANP)多肽循环结构形成的可溶连接肽链linker及带有改进后的TEV蛋白酶切位点的Aβ42融合基因核苷酸编码序列插入到表达载体pMALc2x的多克隆位点，构建重组表达载体质粒；所述改进后的TEV蛋白酶切位点具体为由ENLYFQG改为ENLYFQ；(2)将(1)中构建的重组表达载体质粒转入宿主细胞，经菌落PCR及测序鉴定得到成功导入表达载体的重组菌株；(3)诱导表达含有融合标签MBP的Aβ42融合蛋白，并进行蛋白纯化；(4)采用TEV蛋白酶将(3)所得的融合蛋白中的MBP标签切除并纯化目的蛋白Aβ42多肽。