[发明专利]基于磁固相微萃取-碳量子点荧光猝灭检测叶酸的方法

摘要

本发明公开了一种基于磁固相微萃取‑碳量子点荧光猝灭检测叶酸的方法，采用磁固相微萃取对复杂生物基体样本进行净化，叶酸能猝灭氮掺杂荧光碳量子点的荧光，其猝灭的荧光信号强度与叶酸浓度呈一定线性关系，据此建立了检测叶酸的荧光分光光度法；本发明利用磁性纳米材料具有优异的分散性与生物相溶性，对荧光分光光度法中基体带来严重干扰的物质，采用磁性纳米材料作为吸附剂进行磁固相萃取净化，大大降低了基体的干扰，使测定结果的灵敏度、特异性、重现性得到很大提高。

主权项

一种基于磁固相微萃取‑碳量子点荧光猝灭检测叶酸的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)标准工作曲线的绘制：采用柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲液配置8个浓度在0.05～30 µmol/L范围内的叶酸标准溶液，加入水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，用柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲液定容至5mL，涡旋混匀静置后，于荧光分光光度计上，激发波长为350 nm，发射波长为440 nm测定荧光强度，以荧光猝灭强度对其相应浓度作图进行回归分析，即得到标准工作曲线，由此得到叶酸的线性回归方程； (2) 样品处理血液样品：取5 mL新鲜血液，以8000 r/min转速离心15‑20 min，去除沉淀，并向上层血浆中加入1‑2mL体积浓度10‑15% 的高氯酸溶液沉淀蛋白，于5000 r/min下离心10 ‑15min，取上清液避光保存于4 ℃冰箱待分析测定；尿液样品：取5‑10mL尿液，加入1‑3g活性炭，涡旋混合30‑60s，静置过滤，取其滤液，避光保存于4 ℃冰箱待分析测定；(3) 样品测定：取步骤或步骤处理过的样品，加入磁性纳米材料，涡旋使其充分混匀后，通过外加磁铁进行磁分离，弃去磁性纳米材料，取上清液1‑2mL，向上清液中加入水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，用柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲液定容至5mL，涡旋混匀静置后，于荧光分光光度计上，激发波长为350 nm，发射波长为440 nm测定荧光强度，代入步骤(1)回归方程，计算出样品中叶酸的含量。