[发明专利]生产(R)-乙偶姻基因工程菌株的构建方法及其应用

摘要

本发明公开了一种生产(R)‑乙偶姻基因工程菌株的构建方法及其应用，该方法是将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和NADH氧化酶基因的核苷酸序列进行密码子优化，利用人工合成的方法获得包含三个基因的基因簇；将基因簇插入表达载体中，获得多顺反子重组质粒；将多顺反子重组质粒导入宿主菌E.coli，并敲除主要副产物合成途径的关键基因，获得生产(R)‑乙偶姻的基因工程菌株。本发明提供的工程菌株所用的原料来源广泛、成本低，菌株无致病性，氧化型辅酶NAD+能够有效再生，菌株的(R)‑乙偶姻产量、生产效率高，最高产量可达到72.1 g/L，光学纯度可达99%以上。本发明还利用非粮木薯粉和廉价氮源作为发酵原料生产(R)‑乙偶姻，降低了生产成本。