[发明专利]一种黄曲霉素B1免疫亲和柱的制备方法

摘要

本发明公开了一种黄曲霉素B₁免疫亲和柱的制备方法。该方法的具体步骤为：交联壳聚糖的制备：用二醛对壳聚糖进行交联，再用单醛对未反应的氨基进行交联，得到富含羟基的交联壳聚糖基质；交联壳聚糖经甲基环氧氯丙烷活化后，与黄曲霉素B₁抗体进行偶联，待反应结束后，得到偶联抗体的交联壳聚糖悬浮液；直接装柱。本发明将抗体的非结合活性区域Fc端定向偶联到交联壳聚糖上，更好地保持抗体的活性；利用甲基环氧氯丙烷而不是环氧氯丙烷进行交联反应，通过空间位阻以及疏水相互作用，很好的避免了黄曲霉素B₁抗体中的结合活性位置与交联壳聚糖的非特异性相互作用；甲基环氧氯丙烷上的甲基也很好的降低了交联后暴露出的羟基的反应活性。

主权项

1.一种黄曲霉素B₁免疫亲和柱的制备方法，其特征在于，所述方法包括交联壳聚糖基质的制备、抗体与交联壳聚糖的偶联以及装柱工序，具体工艺步骤如下所述：1)交联壳聚糖基质的制备：称取壳聚糖溶于体积分数1％醋酸溶液中，搅拌并超声至完全溶解；壳聚糖经过二醛交联、单醛交联，真空干燥得到交联壳聚糖基质；2)抗体与交联壳聚糖的偶联：a.取步骤1)交联壳聚糖基质，悬浮于活化剂甲基环氧氯丙烷中，缓慢滴加氢氧化钠水溶液，于50‑70℃恒温水浴振荡器上活化反应4‑8h，反应结束后，用水反复洗涤，真空干燥，得到活化壳聚糖备用；b.将活化壳聚糖分散于黄曲霉素B₁抗体的磷酸盐缓冲液中，于35‑39℃恒温水浴振荡器上进行偶联反应，直至溶液中黄曲霉素B₁抗体的浓度不发生变化为止，待反应结束后，得到偶联抗体的交联壳聚糖混悬液；3)装柱：取步骤2)制备的混悬液装柱，沉降，分别用纯水、磷酸盐缓冲液进行洗涤至黄曲霉素B₁抗体不能检出，在4℃下磷酸盐缓冲液中保存，即得到黄曲霉素B₁免疫亲和柱。