[发明专利]一种筛选参与多能干细胞体外定向分化调节因子的方法有效
| 申请号： | 201710518144.X | 申请日： | 2017-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN107164527B | 公开（公告）日： | 2018-04-20 |
| 发明（设计）人： | 陈留芳;李程;茅永智 | 申请（专利权）人： | 杭州观梓健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6897 | 分类号： | C12Q1/6897;C12N15/85;C12N15/867;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙)11447 | 代理人： | 耿超,王浩然 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本公开涉及一种多能干细胞体外定向分化调节因子筛选方法以及多能干细胞体外定向分化报告基因细胞株，本公开所提供的技术方案能够在全基因组范围内对所有可能参与多能干细胞体外定向分化调控的编码基因、蛋白以及能调控多能干细胞体外定向分化的化合物进行简便、快速的大规模筛查。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 参与 多能 干细胞 体外 定向 分化 调节 因子 方法 | ||
【主权项】：
一种多能干细胞体外定向分化调节因子筛选方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)构建针对细胞特异性标志物的编码基因的同源重组载体，所述同源重组载体包含能与所述细胞特异性标志物共表达的报告基因；所述同源重组载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述细胞特异性标志物的编码基因为成熟肝脏细胞标志物编码基因ALB；(2)将所述同源重组载体转染多能干细胞，获得稳定整合了所述同源重组载体的报告基因株系；所述多能干细胞为1016诱导人多能干细胞；(3)将靶向全基因组的CRISPR文库包装慢病毒获得CRISPR慢病毒文库，用所述CRISPR慢病毒文库感染所述报告基因株系，使每个细胞至多只有一个病毒颗粒感染获得感染后细胞，诱导所述感染后细胞进行定向分化培养获得定向分化细胞，根据报告基因的表达水平对所述定向分化细胞进行分化程度划分，对不同分化程度的细胞进行靶向序列测序，筛选获得与多能干细胞分化程度相关的靶基因种类。
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