[发明专利]利用高效液相色谱快速高效的N‑糖定性与定量分析方法在审
| 申请号： | 201710522447.9 | 申请日： | 2017-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN107367564A | 公开（公告）日： | 2017-11-21 |
| 发明（设计）人： | 刘欣 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学鄂州工业技术研究院;华中科技大学 |
| 主分类号： | G01N30/06 | 分类号： | G01N30/06;G01N30/02 |
| 代理公司： | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙)42231 | 代理人： | 黄君军 |
| 地址： | 436044 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明一种利用高效液相色谱快速高效的N‑糖定性与定量分析方法，属于糖组学分析领域。本发明提供一种高效液相色谱快速高效的N‑糖定性与定量分析方法，利用微波辅助的手段加快N‑糖的去糖基化反应，并结合衍生试剂AQC来标记直接通过酶切获得的葡糖胺，从而达到高效和高灵敏度的N‑糖的定性和定量分析。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 高效 色谱 快速 定性 定量分析 方法 | ||
【主权项】：
一种利用高效液相色谱快速高效的N‑糖定性与定量分析方法，其特征在于：该方法利用微波辅助的手段加快N‑糖的去糖基化反应，并结合衍生试剂AQC来标记直接通过酶切获得的葡糖胺，实现对N‑糖的定性和定量分析，具体包括如下步骤：(1)10μg样品加入pH 8.5的碳酸氢铵缓冲和变性缓冲液中，沸水浴10min变性，冷却至室温后加入2.4μL 10％NP‑40抑制变性剂5min；所述碳酸氢铵缓冲和变性缓冲液的总体积为20μL，其中变性缓冲液为0.48μL；(2)加入1μL的外切糖苷酶PNGse F，微波辅助酶切20min，微波炉中700W功率反应；(3)步骤(2)反应完成后冷却至室温，直接加入20μL AQC乙腈溶液和20μL pH 8.5的碳酸氢铵缓冲液，震荡混匀，40℃水浴20min，反应完成后，作HILIC SPE纯化后HPLC分析；所述乙腈溶液浓度为150mM。
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