[发明专利]PD‑1敲除CD19CAR‑T细胞的制备在审
| 申请号： | 201710539385.2 | 申请日： | 2017-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN107119021A | 公开（公告）日： | 2017-09-01 |
| 发明（设计）人： | 尚小云;张琳琳;李广磊 | 申请（专利权）人： | 王小平 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/113;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京迎硕知识产权代理事务所(普通合伙)11512 | 代理人： | 张群峰,钱扬保 |
| 地址： | 518067 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | PD‑1敲除CD19CAR‑T细胞的制备，包括将CD19CAR质粒及其转座酶质粒、用于敲除PD‑1基因的sgRNA质粒及CAS9质粒与电转试剂混合，加入PBMC细胞中进行电转染；采用偶联CD3或CD3+CD28抗体的磁珠富集CD3阳性T细胞；以及筛选并培养扩增转染后的T细胞以获得PD‑1敲除CD19CAR‑T细胞。本发明选用PiggyBac转座子系统提高了转染效率和转基因的表达效率和时间，简化CART的制备程序，增强了系统的负载量。另外，本发明敲除PD‑1基因时避免了使用病毒载体，安全性更高。 | ||
| 搜索关键词： | pd cd19car 细胞 制备 | ||
【主权项】：
一种制备PD‑1敲除CD19 CAR‑T细胞的方法，包括以下步骤：准备PBMC细胞；准备CD19嵌合抗原受体(CAR)；准备与CD19 CAR配合使用的转座酶质粒，用于将CD19 CAR整合到PBMC细胞的基因组上；准备用于敲除PD‑1基因的sgRNA质粒；准备与sgRNA质粒配合使用来敲除PD‑1基因的CAS9质粒；将准备的CD19 CAR质粒及其转座酶质粒、用于敲除PD‑1基因的sgRNA质粒及CAS9质粒与电转试剂混合，加入准备的PBMC细胞中进行电转染；采用偶联CD3或CD3+CD28抗体的磁珠作为T细胞活化剂并培养扩增转染后的T细胞以获得PD‑1敲除CD19 CAR‑T细胞。
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