[发明专利]一种基于银超晶体的黄曲霉毒素B1快速免标记检测方法

摘要

本发明公开了一种基于银超晶体的黄曲霉毒素B1快速免标记检测方法，属于食品监测等技术领域。首先通过在超大孔介孔二氧化硅模板上负载银，构建介孔结构的银超晶体表面增强拉曼基底，建模样本表面增强拉曼光谱信号的采集，采用密度泛函理论计算黄曲霉毒素B1的理论拉曼光谱，对比计算的理论拉曼光谱和采集的表面增强拉曼光谱对黄曲霉毒素B1进行特征峰归属，表面增强拉曼光谱的预处理，根据特征峰的归属挑选具有代表性的特征变量，采用多元校正的方法建立黄曲霉毒素B1浓度和对应表面增强拉曼光谱变量之间的定量关系模型，模型精确度和稳定性的评估。本方法操作简单，检测速度快、精度较高、稳定性好等可以对黄曲霉毒素B1实现大批量原位检测。

主权项

一种基于银超晶体的黄曲霉毒素B1快速免标记检测方法，其特征在于，该方法包括如下具体步骤：1)超大孔介孔二氧化硅EP‑FDU‑12的制备：三嵌段高分子共聚物EO106PO70EO106与1,3,5‑三甲基苯TMB、氯化钾溶解在盐酸中搅拌，四乙基正硅酸盐TEOS加入上述溶液，再次搅拌，反应结束后将溶液转移到高压反应釜中，反应一段时间后室温下过滤，用热的清水洗两次，室温下干燥，表面活性剂经过煅烧除去，得到的白色粉末为EP‑FDU‑12；2)2D银超晶体2D AgNP的组装：硝酸银溶液通过湿化学的方法浸渍在EP‑FDU‑12介孔二氧化硅粉末中，逐滴滴加，边滴加边混合，让EP‑FDU‑12刚好湿为止，复合材料在减少真空的条件下干燥，干燥后将乙二醇滴在粉末上干燥，还原银，得到棕色粉末，用氢氧化钠溶液清洗，热的蒸馏水清洗两次除去EP‑FDU‑12模板，得到的样品即为2D AgNP；3)样品表面增强拉曼光谱SERS的采集：2D银超晶体的水溶液滴在硅片上，空气中干燥，将其分别浸没在不同浓度的黄曲霉毒素B1溶液中，利用自行搭建的便携式拉曼光谱仪采集拉曼光谱；4)采用密度泛函理论DFT计算黄曲霉毒素B1的理论拉曼光谱：用GaussView构造黄曲霉毒素B1的分子构型，采用DFT的B3LYP方法的B3LYP/6‑31GD(d,p)基组计算黄曲霉毒素B1的理论拉曼光谱，C，H，O原子采用6‑31GD(d,p)基组，黄曲霉毒素B1频率计算的结果在GaussView软件平台上查看，并用相应的修正因子进行修正；5)实现真菌毒素特征拉曼谱峰的归属，用于下一步的多元校正分析；6)建立样品SERS光谱与对应浓度之间的定量关系模型:将采集的拉曼光谱进行一阶导数预处理D1预处理，建模样本按照浓度从小到大排列按照一定的间隔分为顺练集和预测集，采用BP‑Adaboost建模方法，建立真菌毒素浓度与挑选的拉曼特征变量之间的定量关系模型；7)模型的可靠性、稳定性评估：采集不同AFB1浓度的5个样本的拉曼光谱，每个样本平行采集五次光谱，将采集的每条拉曼光谱代入建立的预测模型中，得预测样本的浓度，计算每个样本回收率，平均值，标准偏差和相对标准偏差，评估预测模型的准确性和稳定性。