[发明专利]一种从好氧颗粒污泥中高效提取群体感应信号分子的方法

摘要

本发明公开了一种从好氧颗粒污泥中高效提取群体感应信号分子的方法，以实现对处于好氧颗粒污泥胞外多聚物中群体感应信号分子的高效提取。该方法按照以下步骤进行：(1)胞外多聚物水解；(2)水解上清液收集；(3)液液萃取；(4)减压浓缩；(5)氮吹定容。该方法操作简便，反应条件温和，可有效解决颗粒污泥体系信号分子萃取过程中因胞内物质释放引起的信号分子分解问题，是一种高效可行的信号分子提取方法。

主权项

1.一种从好氧颗粒污泥中提取群体感应信号分子的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：分别利用α‑淀粉酶、β‑淀粉酶、蛋白酶K、脂肪酶水解好氧颗粒污泥样品，分别测量水解后污泥样品的MLVSS；然后等量移取不同酶水解后的好氧颗粒污泥样品，利用L₉(3⁴)正交表通过正交实验方法，设置反应时间30‑50min，以酶解反应结束胞外多糖的释放量为单一指标确定酶促反应最佳条件，取各酶促反应最佳条件下反应结束的泥水混合物，离心收集上清液后经液液萃取、减压蒸馏、氮吹定容后测定各类信号分子浓度，取信号分子含量最高一组对应的水解酶作为最佳水解酶；步骤2：取最佳水解酶在其最佳酶促反应条件下水解好氧颗粒污泥样品后得到的泥水混合物，利用高速冷冻离心机对混合物进行离心分离；步骤3：取离心分离后的上清液置于梨形分液漏斗中，加入有机溶剂作为萃取剂，利用分液漏斗振荡器进行低速振荡，萃取重复若干次，收集有机相；步骤4：通过旋转蒸发仪连续进料口将收集的有机相吸入蒸发瓶中至有机相蒸干，取萃取剂充分洗涤蒸发瓶若干次，洗涤液体收集至离心管中；步骤5：将所述离心管置于氮吹仪上，氮吹过程中不断调节氮吹针高度，使离心管内液面处于震动状态，直至离心管内液体吹干；然后利用溶剂对氮吹后的固体进行定容，完成好氧颗粒污泥中群体感应信号分子的提取和富集。