[发明专利]一种快速和高效质检文库的引物序列组及方法

摘要

本发明公开了一种快速和高效对文库进行质控的引物序列组及方法。所述引物组为NGS‑Lqc‑L1‑F，NGS‑Lqc‑L1‑R；NGS‑Lqc‑M1‑F，NGS‑Lqc‑M1‑R；NGS‑Lqc‑H1‑F，NGS‑Lqc‑H1‑R。本发明人通过对基因组的GC含量为高、中和低三个区域设计3对引物，以基因组作为对照组，对建好的文库和基因组进行Qpcr实验，根据低GC扩增倍数/中GC扩增倍数的比值与1的关系对文库的质量好坏进行判断。

主权项

1.一种快速对文库进行质控的方法，所述方法包括：1)通过NGS‑Lqc‑L1、NGS‑Lqc‑M1和NGS‑Lqc‑H1这3对引物对打断的参照DNA和待测文库进行Qpcr实验，检测每对引物对应于参照DNA和待测文库的6个ct值ct1‑ct6，其中：Ct1是指NGS‑Lqc‑L1这对引物对参照DNA进行Qpcr扩增之后的ct值；Ct4是指NGS‑Lqc‑L1这对引物对待测文库进行Qpcr扩增之后的ct值；Ct2是指NGS‑Lqc‑M1这对引物对参照DNA进行Qpcr扩增之后的ct值；Ct5是指NGS‑Lqc‑M1这对引物对要检测文库进行Qpcr扩增之后的ct值；Ct3是指NGS‑Lqc‑H1这对引物对参照DNA进行Qpcr扩增之后的ct值；Ct6是指NGS‑Lqc‑H1这对引物对要检测文库进行Qpcr扩增之后的ct值；所述NGS‑Lqc‑L1为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4；所述NGS‑Lqc‑M1为SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5；所述NGS‑Lqc‑H1为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6；2)计算M＝低GC扩增倍数/中GC扩增倍数低，N＝高GC扩增倍数/中GC扩增倍数的值，计算公式为M＝2(ct1‑ct4)/2(ct2‑ct5)，N＝2(ct3‑ct6)/2(ct2‑ct5)，3)待测文库均一性判断：M值在0.3以上，并且越接近1，表示待测文库的均一性越好；同时N>1。