[发明专利]检测微卫星不稳定性的多重荧光PCR扩增试剂及试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测微卫星不稳定性的多重荧光PCR扩增试剂及试剂盒。该PCR扩增试剂包括分别针对微卫星位点BAT25、BAT26、D2S123、D5S346及D17S250设计的上游引物和下游引物，能够在同一PCR体系中同时扩增多个微卫星位点并进行多重荧光PCR检测微卫星不稳定性。各微卫星位点的扩增产物经电泳检测后产生的荧光峰没有交叉重叠的现象，检测效率高，灵敏度好。

主权项

1.一种检测微卫星不稳定性的多重荧光PCR扩增试剂，其特征在于，包括：针对微卫星位点BAT25设计的上游引物BAT25‑F1和下游引物BAT25‑R1，所述上游引物BAT25‑F1的碱基序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物BAT25‑R1的碱基序列如SEQ ID No.2所示；针对微卫星位点BAT26设计的上游引物BAT26‑F1和下游引物BAT26‑R1，所述上游引物BAT26‑F1的碱基序列如SEQ ID No.3所示，所述下游引物BAT26‑R1的碱基序列如SEQ ID No.4所示；针对微卫星位点D2S123设计的上游引物D2S123‑F1和下游引物D2S123‑R1，所述上游引物D2S123‑F1的碱基序列如SEQ ID No.5所示，所述下游引物D2S123‑R1的碱基序列如SEQ ID No.6所示；针对微卫星位点D5S346设计的上游引物D5S346‑F1和下游引物D5S346‑R1，所述上游引物D5S346‑F1的碱基序列如SEQ ID No.7所示，所述下游引物D5S346‑R1的碱基序列如SEQ ID No.8所示；以及针对微卫星位点D17S250设计的上游引物D17S250‑F1和下游引物D17S250‑R1，所述上游引物D17S250‑F1的碱基序列如SEQ ID No.9所示，所述下游引物D17S250‑R1的碱基序列如SEQ ID No.10所示；以及针对微卫星位点Penta C设计的上游引物Penta C‑F1和下游引物Penta C‑R1，所述上游引物Penta C‑F1的碱基序列如SEQ ID No.11所示，所述下游引物Penta C‑R1的碱基序列如SEQ ID No.12所示；所述下游引物BAT25‑R1标记有第一荧光基团，所述上游引物BAT26‑F1标记有第二荧光基团，所述上游引物D2S123‑F1标记有第三荧光基团，所述上游引物D5S346‑F1标记有第四荧光基团，所述下游引物D17S250‑R1标记有第五荧光基团，所述上游引物Penta C‑F1和下游引物Penta C‑R1中的至少一个标记有第六荧光基团；所述第一荧光基团、所述第二荧光基团、所述第三荧光基团、所述第四荧光基团、所述第五荧光基团和所述第六荧光基团均选自FAM荧光基团、TAMRA荧光基团、ROX荧光基团和JOE荧光基团中的一种；所述第三荧光基团与所述第四荧光基团选自两种不相同的荧光基团；所述上游引物BAT25‑F1的浓度为50nmol/L～200nmol/L，所述下游引物BAT25‑R1的浓度为50nmol/L～200nmol/L；及/或，所述上游引物BAT26‑F1的浓度为50nmol/L～200nmol/L，所述下游引物BAT26‑R1的浓度为50nmol/L～200nmol/L；及/或，所述上游引物D2S123‑F1的浓度为50nmol/L～200nmol/L，所述下游引物D2S123‑R1的浓度为50nmol/L～200nmol/L；及/或，所述上游引物D5S346‑F1的浓度为50nmol/L～200nmol/L，所述下游引物D5S346‑R1的浓度为50nmol/L～200nmol/L；及/或，所述上游引物D17S250‑F1的浓度为50nmol/L～200nmol/L，所述下游引物D17S250‑R1的浓度为50nmol/L～200nmol/L；所述上游引物Penta C‑F1的浓度为50nmol/L～200nmol/L，所述下游引物Penta C‑R1的浓度为50nmol/L～200nmol/L。