[发明专利]一种快速分析甲壳动物血淋巴细胞类群和数量的方法及应用有效
| 申请号： | 201710583739.3 | 申请日： | 2017-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN107490672B | 公开（公告）日： | 2019-12-06 |
| 发明（设计）人： | 张亦陈;胡锦丽;刘逸尘;晋伟;耿绪云;孙金生 | 申请（专利权）人： | 天津师范大学 |
| 主分类号： | G01N33/483 | 分类号： | G01N33/483;G01N21/84 |
| 代理公司： | 12207 天津市杰盈专利代理有限公司 | 代理人： | 朱红星<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 300387 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于快速检测多种常见甲壳动物血淋巴细胞种类和数量的方法。其原理为凡纳滨对虾、克氏原螯虾以及中华绒螯蟹等甲壳动物血淋巴细胞内的颗粒结构可以作为分类参考，利用具有图像辅助功能的多维全景分析仪，以样点所在分区和辅助图像为依据，可甄别不同类群血淋巴细胞并自动完成统计分析。本方法的特点为:不用染色，避免常规染色及显微镜观察等述诸多人工环节的影响；利用高灵敏度检测器的自动化信号分析，重复性好；多维全景检测仪具有高通量检测能力，数万细胞样点的结果可靠性也远超过人工计数；微量检测所用试剂耗材很少，成本低。本方法不但可用于科学分析、日常监测，还可为分类收集血淋巴细胞提供技术支持，有巨大应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 血淋巴细胞 甲壳动物 多维 样点 全景 高灵敏度检测器 凡纳滨对虾 高通量检测 结果可靠性 克氏原螯虾 显微镜观察 中华绒螯蟹 自动化信号 常规染色 分类收集 辅助图像 技术支持 颗粒结构 科学分析 快速检测 图像辅助 微量检测 自动完成 统计分析 分析仪 检测仪 染色 耗材 可用 分区 细胞 参考 分类 监测 环节 应用 分析 | ||
【主权项】：
1.一种快速检测甲壳动物血淋巴细胞种类和数量的方法， 其特征在于以胞质颗粒的多少和复杂度差异为依据，结合多维全景分析仪的图像辅助功能，区分不同血淋巴细胞类群，对划分的各个类群细胞进行准确鉴定分析并自动完成分类计数和统计分析；按如下的步骤进行：/n（1）样品制备：根据采血量需要，使用微量进样器或一次性注射器吸取抗凝剂，从待测动物步足基部的血窦处抽取10-1000微升血淋巴，混匀后迅速移入固定液，室温固定5分钟，PBS重悬细胞；所述抗凝剂：0.14M NaCl、0.1M 葡萄糖、10mM EDTA、30mM 柠檬酸钠、26mM 柠檬酸；所述固定液：含4%的多聚甲醛的PBS溶液；/n（2）检测和分析：将固定的细胞经70微米细胞筛过滤后上机，中速收集30000个样点数据，以Intensity和Area为横、纵坐标作图把各类血淋巴细胞按照颗粒分布和复杂度区分为4个类群，将单细胞样点测量数据作图，一步即可分出无颗粒，小颗粒，中颗粒以及大颗粒4种不同的细胞类群。/n
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