[发明专利]富集血浆或血清中12种中丰度和低丰度蛋白的方法

摘要

本发明公开了富集血浆或血清中12种中丰度和低丰度蛋白的方法，利用磷酸纤维素为柱料，色谱柱运行缓冲液包含20毫摩尔/升三羟甲基氨基甲烷、100毫摩尔/升氯化钠和1毫摩尔/升乙二胺四乙酸，洗脱液包含20毫摩尔/升三羟甲基氨基甲烷、1摩尔/升氯化钠和1毫摩尔/升乙二胺四乙酸，实现对12种中、低丰度蛋白的同时富集。采用高效液相色谱联合高分辨质谱对富集后样品进行检测，可鉴定这12种中丰度和低丰度蛋白，并进行定量分析。本发明方法的富集效果显著，方法简便，不需要使用昂贵的设备或耗材，成本低廉，便于推广和应用；不需要使用抗体，可以大大降低检测的费用，也可避免由于抗体质量稳定性问题带来的不确定性。

主权项

1.富集血浆或血清中12种中丰度和低丰度蛋白的方法，所述12种中丰度和低丰度蛋白为备解素、补体因子D、凝血因子11、乳铁蛋白、髓过氧化物酶、丝氨酸蛋白酶抑制因子A5、血管性血友病因子、蛋白聚糖4、补体因子H相关蛋白5、静止素Q6硫基氧化酶1、膜突蛋白、纤连蛋白，包括以下步骤：(1)将柱料装至离心管中，并向所述离心管中加入氢氧化钠和氯化钠的溶液对所述柱料进行碱处理，再向所述离心管中加入盐酸溶液对所述柱料进行酸处理；然后，向所述离心管中加入色谱柱运行缓冲液，悬浮所述柱料并静置后离心弃上清，重复多次；最后，向所述离心管中加入所述色谱柱运行缓冲液，悬浮所述柱料后装到空柱中，得到色谱柱并封闭其出口；(2)按照每100微升血浆或血清对应5毫升色谱柱运行缓冲液的比例，用所述色谱柱运行缓冲液稀释血浆或血清，然后上样至所述色谱柱，孵育后，打开所述色谱柱出口使液面下降，待液面降至所述柱料时，加入所述色谱柱运行缓冲液清洗，重复清洗多次；(3)向所述色谱柱中加入洗脱液，孵育后，打开所述色谱柱出口，收集洗脱组分；其中，所述柱料为磷酸纤维素；所述色谱柱运行缓冲液包含20毫摩尔/升三羟甲基氨基甲烷、100毫摩尔/升氯化钠和1毫摩尔/升乙二胺四乙酸，溶剂是超纯水，pH值为8.0；所述洗脱液包含20毫摩尔/升三羟甲基氨基甲烷、1摩尔/升氯化钠和1毫摩尔/升乙二胺四乙酸，溶剂是超纯水，pH值为8.0。