[发明专利]一种分析柞蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法

摘要

本发明涉及蚕丝领域，公开了一种分析柞蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法。本发明先采用碱法脱胶对柞蚕丝和进行脱胶处理，得到丝素纤维，对丝素纤维进行分组，然后分步采用不同蛋白酶对丝素纤维由外及内依次进行酶解，最后利用氨基酸分析对水解程度不同的残余丝素中各种氨基酸的含量进行测定，可以得到各氨基酸在柞蚕丝中的径向分布。本发明根据柞蚕丝丝素纤维径向上氨基酸分布的特点，采用多次酶解法对丝素蛋白进行溶解，特异性高，作用条件温和，对氨基酸的破坏小，使结果更准确。

主权项

1.一种分析柞蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法，其特征在于包括以下步骤：1)称取柞蚕丝作为样品，用去离子水清洗，去除表面污染物，烘干；2)将烘干的样品以1∶95‑105的浴比在含有0.4‑0.6wt％Na2HPO4和0.8‑1.2wt％C17H35COONa的混合溶液中煮沸25‑35min，进行脱胶处理，共脱胶两次；3)脱胶之后，将样品用去离子水冲洗干净，放入55‑65℃烘箱，得到干燥的丝素纤维；4)取直径相近的丝素纤维，等质量分为A、B、C、D、E五组，其中A组作为对照组，不做任何处理；5)将B、C、D、E组以1∶40的浴比放入预先配制好的1.5g/L的组织蛋白酶溶液中，控制反应温度35‑39℃，溶液pH 3～7，反应时间为6h；反应完成后，对酶进行灭活处理，保留B组残余丝素；6)将步骤5)酶解过的C、D、E组以1∶40的浴比放入预先配制好的1.5g/L的胃蛋白酶溶液中，控制反应温度35～40℃，溶液pH 2～4，继续反应6h；反应完成后，对酶进行灭活处理，保留C组残余丝素；7)将步骤6)酶解过的D、E组以1∶40的浴比放入预先配制好的1.5g/L的碱性蛋白酶溶液中，控制反应温度40～55℃，溶液pH 9～10，继续反应6h；反应完成后，对酶进行灭活处理，保留D组残余丝素；8)将步骤7)酶解过的E组以1∶40的浴比放入预先配制好的1.0g/L的胰弹性蛋白酶溶液中，控制反应温度35～39℃，溶液pH8.5～9.2，继续反应6h；反应完成后，对酶进行灭活处理；9)对B、C、D、E组残余丝素进行过滤和洗涤处理，得到在径向上具有不同程度溶蚀的残余丝素；10)利用氨基酸自动分析仪对A和B、C、D、E组残余丝素进行氨基酸分析，可得到各组中氨基酸的种类和含量。