[发明专利]一种诱导成纤维细胞为软骨细胞样细胞的方法

摘要

本发明涉及一种诱导成纤维细胞为软骨细胞样细胞的方法，属于细胞生物学和再生医学领域。该方法针对当前将成纤维细胞转分化为软骨细胞方法中普遍存在的需载体介导和转基因操作、实验设施和技术水平要求相对较高、产生的软骨细胞安全性相对较差等问题，发明了一种利用鱼卵母细胞提取物诱导成纤维细胞重编程为软骨细胞样细胞的方法。由于利用该方法产生的软骨细胞样细胞仅通过鱼卵母细胞提取物的诱导和成软骨细胞诱导培养基的定向诱导培养获得，不涉及外源基因导入，实验操作相对简单，产生的软骨细胞样细胞安全性相对较好，在软骨组织工程和再生医学领域具有广阔的应用前景。

主权项

一种诱导成纤维细胞为软骨细胞样细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）诱导剂的制备，诱导剂为鱼卵母细胞提取物，优选卵黄充满时相时期的鲫鱼，在无菌和低温条件下，取出鱼卵进行研磨、过滤，制备出用于成纤维细胞诱导的鱼卵母细胞提取物；（2）成纤维细胞的制备，无菌条件下将人或动物的皮肤组织充分剪碎，在含有氨苄青霉素和链霉素的DMEM培养基中进行原代和传代培养，获得用于诱导的成纤维细胞；（3）成纤维细胞的诱导，利用所述步骤（1）中制备的诱导剂对所述步骤（2）中制备的成纤维细胞进行诱导，使成纤维细胞向诱导多能干细胞转变；（4）诱导多能干细胞的鉴定，利用免疫组化方法，根据Sox2、Nanog和Oct4/3基因表达情况对成纤维细胞的诱导情况进行鉴定；（5）诱导多能干细胞向软骨细胞样细胞的诱导，将所述步骤（3）中诱导的成纤维细胞和经过所述步骤（4）鉴定诱导成功的诱导多能干细胞在软骨细胞诱导培养基中进行诱导；（6）软骨细胞样细胞的鉴定，利用阿利新蓝染色和HE染色方法鉴定所述步骤（5）中诱导多能干细胞向软骨细胞样细胞的分化情况。