[发明专利]一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201710629508.1 | 申请日： | 2017-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN107236721B | 公开（公告）日： | 2019-10-18 |
| 发明（设计）人： | 杜昱光;程功;任立世;焦思明;孙明;冯翠 | 申请（专利权）人： | 中科荣信（苏州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/56;C12N15/81;C12P19/26;C12P19/14;C12R1/84 |
| 代理公司： | 上海硕力知识产权代理事务所(普通合伙) 31251 | 代理人： | 刘红梅 |
| 地址： | 215152 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用。本发明根据毕赤酵母密码子的偏好性，对枯草芽孢杆菌的壳聚糖酶编码基因进行了优化，优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。进一步利用毕赤酵母表达系统对该所述优化的壳聚糖酶编码基因进行高效分泌表达，获得枯草芽孢杆菌壳聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明获得的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶对不同脱乙酰度的壳聚糖底物均有较高的水解活性，摇瓶发酵产生的粗酶液即具有1mL(蛋白含量0.3mg)降解5g壳聚糖的水解能力，而降解相同量的壳聚糖约需要非特异性商品酶150mg，理论上效率提高500倍；具有良好的工业应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 枯草 芽孢 杆菌 聚糖 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的制备方法，该方法为：所述枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示，将核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示的壳聚糖酶基因构建至表达载体中，然后导入毕赤酵母细胞，诱导并获得分泌表达的壳聚糖酶；所述表达载体为pGBG1，表达载体pGBG1通过如下方式获得：将表达载体pPIC9中的信号肽序列如SEQ ID NO. 4所示进行密码子优化，获得适合在毕赤酵母中表达的信号肽序列如SEQ ID NO. 5所示；利用Nsi I/Xho I双酶切，将表达载体pPIC9中如SEQ ID NO. 4所示的序列替换为如SEQ ID NO. 5所示的信号肽序列，得到表达载体pGBG1。
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