[发明专利]一种溶液中枸橼酸含量的高通量测定方法在审
申请号: | 201710646028.6 | 申请日: | 2017-08-01 |
公开(公告)号: | CN107505276A | 公开(公告)日: | 2017-12-22 |
发明(设计)人: | 章登吉;杨云光;李杰;邓小洁;常亚敏 | 申请(专利权)人: | 上海美迪西生物医药股份有限公司;美迪西普亚医药科技(上海)有限公司 |
主分类号: | G01N21/33 | 分类号: | G01N21/33 |
代理公司: | 上海瀚桥专利代理事务所(普通合伙)31261 | 代理人: | 曹芳玲,熊子君 |
地址: | 201299 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明涉及一种溶液中枸橼酸含量的高通量测定方法,包括配制枸橼酸标准品;配制含有L‑苹果酸脱氢酶、L‑乳酸脱氢酶和NADH的酶解反应液A液;配制含有枸橼酸裂解酶的酶解反应液B液;在多孔紫外微孔板的各孔中加入酶解反应液A液;向多孔紫外微孔板的各孔分别加入枸橼酸标准品和待测样品,置于酶标仪上读取各枸橼酸标准品微孔的吸光度值ASTD1以及待测样品微孔的吸光度值ASP1;在多孔紫外微孔板的各孔中再加入酶解反应液B液,置于酶标仪上读取各枸橼酸标准品微孔的吸光度值ASTD2以及待测样品微孔的吸光度值ASP2;将各枸橼酸标准品微孔的ASTD1和ASTD2的差值与各枸橼酸标准品的浓度回归拟合来构建标准曲线;将ASP1和ASP2的差值插入标准曲线,得到对应的浓度。 | ||
搜索关键词: | 一种 溶液 枸橼酸 含量 通量 测定 方法 | ||
【主权项】:
一种溶液中枸橼酸含量的高通量测定方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)配制不同浓度梯度的枸橼酸标准品;(2)配制含有L‑苹果酸脱氢酶、L‑乳酸脱氢酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的酶解反应液A液;(3)配制含有枸橼酸裂解酶的酶解反应液B液;(4)在多孔紫外微孔板的各孔中加入所述酶解反应液A液;(5)向所述多孔紫外微孔板的各孔分别加入枸橼酸标准品和一个以上的待测样品,反应一段时间后,置于酶标仪上在特定紫外波长下读取各枸橼酸标准品微孔的吸光度值ASTD1、以及待测样品微孔的吸光度值ASP1;(6)在所述多孔紫外微孔板的各孔中再加入酶解反应液B液,反应一段时间后,置于酶标仪上在所述特定紫外波长下读取各枸橼酸标准品微孔的吸光度值ASTD2、以及待测样品微孔的吸光度值ASP2;(7)将各枸橼酸标准品微孔的ASTD1和ASTD2的差值ΔA与各枸橼酸标准品的浓度进行回归拟合来构建标准曲线;(8)将ASP1和ASP2的差值插入所述标准曲线,得到对应的浓度,即可得到待测样品的枸橼酸含量。
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